货号

H191

种属

人

细胞来源

从ATCC/中科院/协和医院等地引进

生长特性

贴壁 多边形

培养条件

培养基
：90%DMEM+10%FBS（推荐HAKATA优等胎牛血清
，货号:HN-FBS-500）

温度

：37℃     气相
：95%空气,5%CO2

传代

1.用75%酒精喷洒整个培养瓶消毒

，将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲


，.然后置于无菌操作台，打开瓶口，将其中的培养液去掉，再往其中加入5-6mL新鲜培养基(以T25培养瓶为例)并置于细胞培养箱中培养



，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代





，该细胞生长缓慢，一般2到3天换一次液



；

2.待细胞长满瓶底面积80%-90%



，需要对其进行传代，传代比例为1:2到1:4；

3传代步骤：将0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°预热，倒掉培养瓶中的培养基


，往培养瓶中加入3-5 ml PBS
，轻晃洗涤后弃去
。往瓶中加1-2 ml预热好的胰酶，置于37°孵育消化（第一次消化需时常取出置于显微镜下观察，以显微镜下细胞触角回收变圆




、轻拍瓶壁见细胞脱落为最佳消化时间，记录最佳消化时间，以便于下次消化），消化好后加入3ml完全培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞

，使之完全脱落，然后收集细胞悬液

，1200rpm离心3min，弃上清

，加入完全培养基重悬细胞，进行传代
。

保存

冻存条件

：80%完全培养基+10%FBS+10%DMSO

(备注


：建议使用本公司的冷冻液（H-W-100），用4度保存的冷冻液直接重悬细胞



，不能预热后使用
。)

保存条件：液氮存储

供应限制

经供研究之用

常见问题及解决方案

1.培养瓶有破裂
，培养液有漏液：细胞极大可能会污染

，所以尊龙凯时人生就是搏会及时安排帮老师解决
。

2.收到细胞后尽快更换新鲜培养基
。

3.细胞漂浮


：培养瓶不开封

，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱

。1-2小时后观察

，如细胞大部分又贴回瓶底


，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉
，留8-10ml培养液培养观察
，细胞生长至汇合度80%，进行消化传代

；如细胞还是不贴壁
，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察



，尊龙凯时人生就是搏的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决
。