货号

M033

种属

小鼠

细胞来源

ATCC/中科院/协和医院等地引进

生长特性

贴壁 成纤维细胞样

培养条件

培养基
：90%DMEM(H)+10%FBS+2mM L-谷氨酰胺+10mM HEPES (推荐HAKATA优等胎牛血清
，货号:HN-FBS-500)

温度：37℃     气相

：95%空气

，5%二氧化碳

传代

1.用75%酒精喷洒整个培养瓶消毒
，将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲，.然后置于无菌操作台，打开瓶口
，将其中的培养液去掉



，再往其中加入5-6mL新鲜培养基并置于细胞培养箱中培养



，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代，一般2天换一次液
；

2.待细胞长满瓶底面积80-90%

，需要对其进行传代
，传代比例为1:2-1
：4
；

3传代步骤


：将0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37℃预热
，倒掉培养瓶中的培养基，往培养瓶中加入3-5 ml PBS
，轻晃洗涤后弃去


。往瓶中加1-2 ml预热好的胰酶
，置于室温孵育消化（第一次消化需置于显微镜下观察

，以显微镜下细胞触角回收变圆


、轻拍瓶壁见细胞脱落为最佳消化时间，记录最佳消化时间
，以便于下次消化）
，消化好后加入3ml完全培养基终止消化
。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞
，使之完全脱落



，然后收集细胞悬液






，1000rpm离心3min
，弃上清
，加入完全培养基重悬细胞
，进行传代。

保存

冻存条件


：50%完全培养基+40%FBS+10%DMSO

(备注

：建议使用本公司的冷冻液（H-W-100），用4度保存的冷冻液直接重悬细胞

，不能预热后使用

。)

保存条件：液氮存储

供应限制

仅供研究之用

常见问题及解决方案

1.培养瓶有破裂



，培养液有漏液
：细胞极大可能会污染



，所以尊龙凯时人生就是搏会及时安排帮老师解决
。

2.收到细胞后尽快更换为新鲜培养基。

3.细胞漂浮

：培养瓶不开封

，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱
。1-2小时后观察

，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常

，剩余漂浮的细胞可以去掉


，留8-10ml培养液培养观察
，细胞生长至汇合度80%，进行消化传代



；如细胞还是不贴壁
，将细胞离心收集转到新培养瓶
，原培养瓶加部分培养液继续培养
，中间注意观察

，尊龙凯时人生就是搏的技术人员会一直跟踪指导
，直到问题解决
。