货号

M018

种属

小鼠

细胞来源

ATCC/中科院/协和医院等地引进

生长特性

贴壁成骨细胞样

培养条件

培养基

：DMEM+10%FBS (推荐HAKATA优等胎牛血清，货号:HN-FBS-50)

温度：37℃     气相：95%空气





，5%二氧化碳

传代

1.用75%酒精喷洒整个培养瓶消毒


，将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲

，.然后置于无菌操作台


，打开瓶口
，将其中的培养液去掉


，再往其中加入5-6mL新鲜培养基并置于细胞培养箱中培养

，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代


，一般2天换一次液
；

2.待细胞长满瓶底面积70-80%

，需要对其进行传代，传代比例为1:2-1
：4
；

3传代步骤
：将0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37℃预热


，倒掉培养瓶中的培养基
，往培养瓶中加入3-5 ml PBS


，轻晃洗涤后弃去
。往瓶中加1-2 ml预热好的胰酶



，置于室温孵育消化（第一次消化需置于显微镜下观察，以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为最佳消化时间，记录最佳消化时间


，以便于下次消化），消化好后加入3ml完全培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之完全脱落


，然后收集细胞悬液
，1000rpm离心3min


，弃上清


，加入完全培养基重悬细胞
，进行传代。

保存

冻存条件：70%完全培养基+20%FBS+10%DMSO

(备注
：建议使用本公司的冷冻液（H-W-100），用4度保存的冷冻液直接重悬细胞，不能预热后使用。)

保存条件

：液氮存储

供应限制

仅供研究之用

常见问题及解决方案

1.培养瓶有破裂


，培养液有漏液

：细胞极大可能会污染

，所以尊龙凯时人生就是搏会及时安排帮老师解决

。

2.收到细胞后尽快更换为含 10%血清的新鲜培养基，如因特殊情况需要继续使用原瓶培养基
，请在原瓶培养基中额外添加 10%的血清（原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过 72 小时）

3.细胞漂浮



：培养瓶不开封


，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱
。1-2小时后观察，如细胞大部分又贴回瓶底
，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉



，留8-10ml培养液培养观察
，细胞生长至汇合度80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁

，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养




，中间注意观察


，尊龙凯时人生就是搏的技术人员会一直跟踪指导


，直到问题解决


。