产品说明(可下载)人热休克蛋白70定量分析酶联免疫检测试剂盒
本试剂盒仅供科研使用。用于体外定量检测人血清、血浆中的热休克蛋白70原浓度。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分是否完整 。如有产品包装破损或质量投拆 ，请在收到货一个月之内联系尊龙凯时人生就是搏。
热休克蛋白70原简介 ：
热休克蛋白70（HSP70） ，也叫做热休克蛋白1A (HSPA1A) 。是一个属于保护性热休克蛋白70家族的一员 ，分子量约70千道尔顿。HSP70在各类细胞中都是丰富表达的保守蛋白 。HSP70蛋白的N端具有核苷酸结合且具ATP酶活性的结构，C端底物结合结构域 。人的HSP70与小鼠和大鼠的蛋白序列分别有95%和97%的同源性 。
Hsp70的核苷酸及底物结合结构协同起作用达到保护新生蛋白正确折叠，帮助折叠错误的蛋白或无功能重新正确折叠成有功能的蛋白 。HSP70能协助蛋白通过细胞膜，阻止蛋白的过度聚集 ，能协助过氧化物酶对错误的蛋白进行降解 。在病理学方面，许多种的肿瘤中都观察到HSP70的增加 。在一些神经组退化的病症中 ，也因协助错误折叠蛋白的再折叠而引起HSP70的积累，而观察到HSP70的大量升高 。
检测原理:
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中热休克蛋白70的浓度。热休克蛋白70捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时 ，其中的热休克蛋白70会与捕获抗体结合，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。当加入辣根过氧化物酶标记的抗人热休克蛋白70抗体后 ，抗人热休克蛋白70抗体与热休克蛋白70接合 ，形成夹心的免疫复合物 ，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去 。最后加入显色剂，若样本中存在热休克蛋白70将会形成免疫复合物，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色 。通过酶标仪检测 ，读其450nm处的OD值 ，热休克蛋白70浓度与OD450值之间呈正比 ，通过参考品绘制标准曲线，对照未知样本中OD值，即可算出标本中热休克蛋白70浓度 。
人热休克蛋白70定量分析酶联免疫检测试剂盒组成:
组分 | 规格（96T/48T） |
人热休克蛋白70预包被板 | 12条/6条 |
标准品稀释液 | 10ml/5ml |
人热休克蛋白70标准品 | 2支/1支(冻干)* |
抗体HRP结合物 | 10ml/5ml |
浓缩洗涤液 20× | 30ml/15ml |
TMB底物 | 10ml/5ml |
中止液 | 5ml/3ml |
封板胶纸 | 3/2张 |
说明书 | 1份 |
标本收集:
1.标本的收集请按下列流程进行操作 ；
A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可 ；
B.血清标本应是自然凝固后，取上清，避免在冰箱中凝固血液 ；
C.血浆标本，推荐用EDTA的方法收集若待测样本不能及时检测 ，
D.标本收集后请分装 ，冻存于－20℃，避免反复冻融 。
2.血清标本不应添加任何防腐剂或抗凝剂 ；
3.标本应清澈透明，检测前样本中如有悬浮物应通过离心去除。
4.请勿使用溶血 ，高血脂或污染的标本检测 ，否则结果将不准确 。
注意事项:
1.试剂盒请保存在2～8℃ 。
2.浓缩洗涤液因在低温下可能有结晶 ，请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液 。
3.标准品复溶加样后 ，剩余部份请丢弃 。
4.底物请勿接触氧化剂和金属 。
5.加样时 ，请及时更换枪头，避免交叉污染。
6.严禁混用不同批号的试剂盒组份 。
7.充分混匀对保证反应结果的准性很重要 ，在加液后请轻轻叩击边缘以保证混匀 。
8.室温反应，请严格控制在25～28℃ 。
9.洗涤过程是至关重要的 ，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大 。
10.试验中标准品和样本检测时建议作双复孔 。
11.加样过程中避免气泡的产生 。
检测前准备工作:
1.试剂盒自冰箱中取出后应置室温（25～28℃）平衡20分钟；每次检测后剩余试剂请及时于2～8℃保存 。
2.将浓缩洗涤液用双蒸水或去离子水稀释(1份加19份水)。
3. 将检测抗体用检测抗体稀释液按标识提前10分钟配制成工作浓度 ；
3.如有5X准品稀释液，请按所需量用双蒸水或去离子水稀释(1份加4水) 。
4.标准品: 按标签复溶体积加入标准品稀释液复溶使热休克蛋白70终浓度达到1000ng/ml，室温反应，请严格控制在25～28℃ ，静置10~15分钟后轻轻混悬（建议抽吸几次）待彻底溶解，用标准品稀释液倍比梯度稀释后依次加入检测孔中 。（标准曲线取七个点 ，最高浓度为1000ng/ml,标准品稀释液直接加入作为0浓度.）下图为标准品稀释示意图 。
洗涤方法:
自动洗板机或人工洗板：每孔洗涤液为300ul ，注入与吸出间隔15-30秒 。洗板5次。最后一次洗板完成后将板倒扣着在厚吸水纸上用力拍干。
实验过程需自备的材料 ：
1.不同规格的加样枪及相应的枪头 ；
2.酶标仪 ；
3.自动洗板机；
4.去离子水或双蒸水 ；
操作步骤:
1.通过计算并确定一次性实验所需的板条数 ，取出所需板条放置在框架内 ，暂时用不到板条请放回铝箔袋密封 ，保存于4℃ 。
2.建议设置本底较正孔 ，即空白孔,设置方法为该孔只加TMB显色液和中止液 。每次实验均需做标准品对照并画出标准曲线 。
3.分别将稀释好的标本或不同浓度标准品(100ul/孔)加入相应孔中 ，用封板胶纸封住反应孔，37℃孵育120分钟 。
4.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干 。
5.每孔加入HRP抗体结合物工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔，37℃孵育孵育60分钟 。
6.洗板5次 ，且最后一次置厚吸水纸上拍干 。
7. 加入显色剂TMB100ul/孔 ，避光室温（25～28℃）孵育20分钟 。
8. 加入终止液50ul/孔,混匀后即刻测量OD450值。
结果判断:
1.复孔的值在20%的差异范围内结果才有效，复孔的值平均后可作为测量值 。
2.每个标准品或标本的OD值应减去本底校正孔的OD值 。
3.手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点 。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度 。
4.若标本OD值高于标准曲线上限 ，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数
典型数值和参考曲线
浓度ng/ml | 典型OD值1 | 典型OD值2 | OD平均值 |
0 | 0.094 | 0.07 | 0.082 |
15.625 | 0.211 | 0.151 | 0.181 |
31.25 | 0.379 | 0.335 | 0.357 |
62.5 | 0.584 | 0.5 | 0.542 |
125 | 0.836 | 0.756 | 0.796 |
250 | 1.152 | 1.024 | 1.088 |
500 | 1.435 | 1.345 | 1.39 |
1000 | 1.857 | 1.665 | 1.761 |
人热休克蛋白70参考标准曲线
注意 ：本图仅供参考 ，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算标本含量 。
灵敏度 ，特异性和重复性:
1.灵敏度 ：多次重复结果表明，最小检出量为7.2ng/ml。
2.特异性：与人的GRP-78、HSPA2、HSPA6、HSPA8等没有交叉反应 。
3.重复性 ：板内，板间变异系数均<10%.
参考文献:
1. Gaudio, E. et al. (2013) Blood 121:351.
2. Liu, M. et al. (2008) J. Biol. Chem. 283:35783.
3. Cho, H.S. et al. (2012) Nat. Commun. 3:1072.
4. Wang, A.M. et al. (2013) Nat. Chem. Biol. 9:112.
5. Wu, F.H. et al. (2012) Cancer Lett. 317:157.
6. McDonough, H. & C. Patterson (2003) Cell Stress Chaperones 8:303.
| 货号 | 产品名称 | 规格 | 价格 | 指令 |
| HH-124 | 人的热休克蛋白70ELISA试剂盒Human HSP70 ELISA KIT | 96T/48T | ￥4200.00/2600.00.00 | 放入购物车 》 |
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