产品说明(可下载)人的髓系细胞触发受体-1定量分析酶联免疫检测试剂盒
本试剂盒仅供科研使用 。用于体外定量检测人血清 、血浆或细胞培养上清液中的TREM-1浓度。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分是否完整 。如有产品包装破损或质量投拆，请在收到货一个月之内联系尊龙凯时人生就是搏 。
TREM-1简介：
髓系细胞触发受体-1(在髓系细胞上表达的触发受体)是一种具单链Ig球蛋白样的结构域的在单核细胞表面表达的I型跨膜蛋白 。作为一个与NK细胞相关的受体家族的成员，TREM1在一种调节蛋白DAP12的协同下 ，激活NK细胞膜内下游的信号 。据报税已发现的其它几种TREM家族蛋白成员与TREM1在结构上相似 ，但一般只有30%同源性。
细菌的脂多糖可上调TREM1的表达 ，如果用抗体“屏蔽”掉TREM1的话 ，可导致单核细胞表达IL-8、MCP-1和TNFα的表达 ，表明该受体在炎症反应中有重要作用。一般认为 ，TREM1受体介导由细菌感染 、真菌感染和脓毒性休克等的炎症反应
检测原理:
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中TREM-1的浓度。TREM-1捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时，其中的TREM-1会与捕获抗体结合，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。当加入生物素化的抗人TREM-1抗体后 ，抗人TREM-1抗体与TREM-1接合 ，形成夹心的免疫复合物 ，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去 。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素 。生物素与亲合素特异性结合，亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来 ；其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。最后加入显色剂 ，若样本中存在TREM-1将会形成免疫复合物 ，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色 。通过酶标仪检测 ，读其450nm处的OD值 ，TREM-1浓度与OD450值之间呈正比，通过参考品绘制标准曲线 ，对照未知样本中OD值 ，即可算出标本中TREM-1浓度 。
人TREM-1定量分析酶联免疫检测试剂盒组成:
组分 | 规格（96T/48T） |
人TREM-1预包被板 | 12条/6条 |
样本分析缓冲液 | 5ml/3ml |
标准品稀释液 | 10ml/5ml |
人TREM-1标准品 | 2支/1支(冻干) |
人TREM-1生物素化抗体 | 10ml/5ml |
亲和素连接的HRP酶 | 10ml/5ml |
浓缩洗涤液 20× | 30ml/15ml |
TMB底物 | 10ml/5 ml |
中止液 | 5ml/3 ml |
封板胶纸 | 3/2张 |
说明书 | 1份 |
标本收集:
1.标本的收集请按下列流程进行操作 ；
A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可 ；
B.血清标本应是自然凝固后 ，取上清，避免在冰箱中凝固血液；
C.血浆标本 ，推荐用EDTA的方法收集若待测样本不能及时检测，
D.标本收集后请分装 ，冻存于－20℃，避免反复冻融 。
2.血清标本不应添加任何防腐剂或抗凝剂；
3.标本应清澈透明，检测前样本中如有悬浮物应通过离心去除。
4.请勿使用溶血 ，高血脂或污染的标本检测，否则结果将不准确 。
注 ：人血清或血浆样本请用样本分析缓冲液做倍比稀释后再检测 。
注意事项:
1.试剂盒请保存在2～8℃。
2.浓缩洗涤液因在低温下可能有结晶 ，请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
3.标准品复溶加样后，剩余部份请丢弃 。
4.底物请勿接触氧化剂和金属 。
5.加样时 ，请及时更换枪头 ，避免交叉污染。
6.严禁混用不同批号的试剂盒组份 。
7.充分混匀对保证反应结果的准性很重要 ，在加液后请轻轻叩击边缘以保证混匀 。
8.室温反应 ，请严格控制在25～28℃ 。
9.洗涤过程是至关重要的 ，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大 。
10.试验中标准品和样本检测时建议作双复孔。
11.加样过程中避免气泡的产生 。
12.血清和血浆标本的检测时，检测抗体的孵育时间应适当延长 。
检测前准备工作:
1.试剂盒自冰箱中取出后应置室温(25～28℃)平衡20分钟 ；每次检测后剩余试剂请及时于2～8℃保存 。
2.将浓缩洗涤液用双蒸水或去离子水稀释(1份加19份水) 。
3.如有5x标准品稀释液，请按所需量用双蒸水或去离子水稀释(1份加4水) 。
4.标准品: 按标签复溶体积加入标准品稀释液复溶使TREM-1终浓度达到6000pg/ml，室温反应 ，请严格控制在25～28℃，静置10~15分钟后轻轻混悬（建议抽吸几次）待彻底溶解，用标准品稀释液倍比梯度稀释后依次加入检测孔中。（标准曲线取七个点 ，最高浓度为6000 pg/ml,标准品稀释液直接加入作为0浓度.）
洗涤方法:
自动洗板机或人工洗板：每孔洗涤液为300ul，注入与吸出间隔15-30秒 。洗板5次 。最后一次洗板完成后将板倒扣着在厚吸水纸上用力拍干 。
实验过程需自备的材料 ：
1.不同规格的加样枪及相应的枪头 ；
2.酶标仪；
3,自动洗板机 ；
4,去离子水或双蒸水 ；
操作步骤:
1.通过计算并确定一次性实验所需的板条数，取出所需板条放置在框架内 ，暂时用不到板条请放回铝箔袋密封，保存于4℃ 。
2.建议设置本底较正孔 ，即空白孔,设置方法为该孔只加TMB显色液和中止液 。每次实验均需做标准品对照并画出标准曲线。
3.分别将标本或不同浓度标准品(100ul/孔)加入相应孔中，用封板胶纸封住反应孔 ，室温(25～28℃)孵育120分钟 。对于血清或血浆标本 ，请加入50 ul样本分析缓冲液后加50 ul标本, 如稀释量大，请将样本与样本分析缓冲液等量加入，不足部分用标准品稀释液补充至100ul。
4.洗板5次 ，且最后一次置厚吸水纸上拍干 。
5.加入生物素化抗体工作液(100ul/孔) 。用封板胶纸封住反应孔 ，室温(25～28℃)孵育60分钟。
6.洗板5次 ，且最后一次置厚吸水纸上拍干 。
7.加入亲和素连接的HRP酶工作液(100ul/孔) 。用封板胶纸封住反应孔 ，避光室温(25～28℃)孵育20分钟 。
8.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。
9.加入显色剂TMB100ul/孔 ，避光室温(25～28℃)孵育20分钟 。
10.加入终止液50ul/孔,混匀后即刻测量OD450值。
结果判断:
1.复孔的值在20%的差异范围内结果才有效，复孔的值平均后可作为测量值 。
2.每个标准品或标本的OD值应减去本底校正孔的OD值。
3.手工绘制标准曲线 。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标 ，以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度 。
4.若标本OD值高于标准曲线上限 ，应适当稀释后重测 ，计算浓度时应乘以稀释倍数。
典型数值和参考曲线
浓度pg/ml | 典型OD值1 | 典型OD值2 | OD平均值 |
0 | 0.1013 | 0.1511 | 0.1262 |
187.5 | 0.3521 | 0.3787 | 0.3654 |
375 | 0.4938 | 0.5466 | 0.5202 |
750 | 0.7658 | 0.832 | 0.7989 |
1500 | 1.1625 | 1.0553 | 1.1089 |
3000 | 1.7025 | 1.5393 | 1.6209 |
6000 | 2.3601 | 2.3767 | 2.3684 |
人 TREM-1参考标准曲线
注意：本图仅供参考 ，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算标本含量 。
灵敏度 ，特异性和重复性:
1.灵敏度：多次重复结果表明 ，最小检出量为24.5pg/ml 。
2.特异性：与人BDNF,Cardiotropin-1,CD4,CD40,CNTF,Epo, Leptin,LIF,MIF等没有交叉反应 。
3.重复性 ：板内，板间变异系数均<10%.
参考文献:
1. Colonna, M. (2003) Nat. Rev. Immunol. 3:1.
2. Allcock, R.J.N. et al. (2003) Eur. J. Immunol. 33:567.
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4. Gibot, S. et al. (2005) Int. Care Med. 31:594.
5. Gibot, S. and A. Cravoisy (2004) Clin. Med. Res. 2:181.
6. Koussoulas, V. et al. (2006) Eur. J. Gastroenterol. Hepatol. 18:375.
7. Begum, N.A. et al. (2004) Infect. Immunol. 72:937
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