人的髓系细胞触发受体-1定量分析酶联免疫检测试剂盒

本试剂盒仅供科研使用
。用于体外定量检测人血清
、血浆或细胞培养上清液中的TREM-1浓度。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分是否完整。如有产品包装破损或质量投拆，请在收到货一个月之内联系尊龙凯时人生就是搏。

TREM-1简介：

髓系细胞触发受体-1(在髓系细胞上表达的触发受体)是一种具单链Ig球蛋白样的结构域的在单核细胞表面表达的I型跨膜蛋白。作为一个与NK细胞相关的受体家族的成员，TREM1在一种调节蛋白DAP12的协同下，激活NK细胞膜内下游的信号。据报税已发现的其它几种TREM家族蛋白成员与TREM1在结构上相似，但一般只有30%同源性。

细菌的脂多糖可上调TREM1的表达，如果用抗体“屏蔽”掉TREM1的话
，可导致单核细胞表达IL-8
、MCP-1和TNFα的表达，表明该受体在炎症反应中有重要作用
。一般认为，TREM1受体介导由细菌感染、真菌感染和脓毒性休克等的炎症反应

检测原理:

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中TREM-1的浓度。TREM-1捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时，其中的TREM-1会与捕获抗体结合，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。当加入生物素化的抗人TREM-1抗体后，抗人TREM-1抗体与TREM-1接合，形成夹心的免疫复合物
，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去
。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。生物素与亲合素特异性结合
，亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来；其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。最后加入显色剂，若样本中存在TREM-1将会形成免疫复合物

，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质
，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测，读其450nm处的OD值，TREM-1浓度与OD₄₅₀值之间呈正比，通过参考品绘制标准曲线，对照未知样本中OD值

，即可算出标本中TREM-1浓度。

人TREM-1定量分析酶联免疫检测试剂盒组成:

标本收集:

1.标本的收集请按下列流程进行操作；

A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可
；

B.血清标本应是自然凝固后
，取上清，避免在冰箱中凝固血液；

C.血浆标本，推荐用EDTA的方法收集若待测样本不能及时检测
，

D.标本收集后请分装，冻存于－20℃
，避免反复冻融
。

2.血清标本不应添加任何防腐剂或抗凝剂；

3.标本应清澈透明
，检测前样本中如有悬浮物应通过离心去除

。

4.请勿使用溶血，高血脂或污染的标本检测
，否则结果将不准确。

注
：人血清或血浆样本请用样本分析缓冲液做倍比稀释后再检测
。

注意事项:

1.试剂盒请保存在2～8℃。

2.浓缩洗涤液因在低温下可能有结晶
，请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液
。

3.标准品复溶加样后
，剩余部份请丢弃。

4.底物请勿接触氧化剂和金属
。

5.加样时，请及时更换枪头，避免交叉污染。

6.严禁混用不同批号的试剂盒组份。

7.充分混匀对保证反应结果的准性很重要，在加液后请轻轻叩击边缘以保证混匀。

8.室温反应，请严格控制在25～28℃
。

9.洗涤过程是至关重要的，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。

10.试验中标准品和样本检测时建议作双复孔。

11.加样过程中避免气泡的产生。

12.血清和血浆标本的检测时，检测抗体的孵育时间应适当延长。

检测前准备工作: 

1.试剂盒自冰箱中取出后应置室温(25～28℃)平衡20分钟；每次检测后剩余试剂请及时于2～8℃保存。

2.将浓缩洗涤液用双蒸水或去离子水稀释(1份加19份水)。

3.如有5x标准品稀释液，请按所需量用双蒸水或去离子水稀释(1份加4水)。

4.标准品: 按标签复溶体积加入标准品稀释液复溶使TREM-1终浓度达到6000pg/ml，室温反应，请严格控制在25～28℃，静置10~15分钟后轻轻混悬（建议抽吸几次）待彻底溶解，用标准品稀释液倍比梯度稀释后依次加入检测孔中。（标准曲线取七个点，最高浓度为6000 pg/ml,标准品稀释液直接加入作为0浓度.）

洗涤方法:

自动洗板机或人工洗板：每孔洗涤液为300ul，注入与吸出间隔15-30秒。洗板5次
。最后一次洗板完成后将板倒扣着在厚吸水纸上用力拍干。

实验过程需自备的材料：

1.不同规格的加样枪及相应的枪头；   

2.酶标仪；

3,自动洗板机
；                     

4,去离子水或双蒸水；

操作步骤:

1.通过计算并确定一次性实验所需的板条数，取出所需板条放置在框架内，暂时用不到板条请放回铝箔袋密封，保存于4℃。

2.建议设置本底较正孔，即空白孔,设置方法为该孔只加TMB显色液和中止液。每次实验均需做标准品对照并画出标准曲线。

3.分别将标本或不同浓度标准品(100ul/孔)加入相应孔中，用封板胶纸封住反应孔，室温(25～28℃)孵育120分钟
。对于血清或血浆标本，请加入50 ul样本分析缓冲液后加50 ul标本, 如稀释量大，请将样本与样本分析缓冲液等量加入，不足部分用标准品稀释液补充至100ul
。   

4.洗板5次
，且最后一次置厚吸水纸上拍干。

5.加入生物素化抗体工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔，室温(25～28℃)孵育60分钟
。   

6.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。

7.加入亲和素连接的HRP酶工作液(100ul/孔)
。用封板胶纸封住反应孔
，避光室温(25～28℃)孵育20分钟
。

8.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。

9.加入显色剂TMB100ul/孔
，避光室温(25～28℃)孵育20分钟
。

10.加入终止液50ul/孔,混匀后即刻测量OD450值。

结果判断:

1.复孔的值在20%的差异范围内结果才有效，复孔的值平均后可作为测量值。

2.每个标准品或标本的OD值应减去本底校正孔的OD值。

3.手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点
。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。

4.若标本OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测
，计算浓度时应乘以稀释倍数
。

典型数值和参考曲线

人 TREM-1参考标准曲线

注意
：本图仅供参考
，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算标本含量。

灵敏度，特异性和重复性:

1.灵敏度：多次重复结果表明，最小检出量为24.5pg/ml。

2.特异性：与人BDNF,Cardiotropin-1,CD4,CD40,CNTF,Epo, Leptin,LIF,MIF等没有交叉反应。

3.重复性
：板内，板间变异系数均<10%.

参考文献:

1. Colonna, M. (2003) Nat. Rev. Immunol. 3:1.

2. Allcock, R.J.N. et al. (2003) Eur. J. Immunol. 33:567.

3. Kelker, M.S. et al. (2004) J. Mol. Biol. 344:1175.

4. Gibot, S. et al. (2005) Int. Care Med. 31:594.

5. Gibot, S. and A. Cravoisy (2004) Clin. Med. Res. 2:181.

6. Koussoulas, V. et al. (2006) Eur. J. Gastroenterol. Hepatol. 18:375.

7. Begum, N.A. et al. (2004) Infect. Immunol. 72:937