人的肝细胞生长因子定量分析酶联免疫检测试剂盒

本试剂盒仅供科研使用。用于体外定量检测人血清
、血浆或细胞培养上清液中的HGF浓度。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分是否完整。如有产品包装破损或质量投拆，请在收到货一个月之内联系尊龙凯时人生就是搏
。

HGF简介
：

肝细胞生长因子(HGF)

，也称为散射因子和肝细胞生成素A

，属于血纤维蛋白亚家族的一种多效性蛋白
。成熟的HGF蛋白由60 kDa α 链30 kDa β 链通过二硫键连接而成的二聚体，由成纤维细胞、脂肪细胞

、平滑肌细胞和内皮细胞表达产生

。HGF能够通过刺激细胞分散和微血管的生成
，诱导上皮/内皮的形态变化，从而在器官形成、组织修复和血管生成等方面起作用。在甲状腺中，HGF能够通过诱导甲状腺细胞的增殖、迁移
、去分化以及抑制促甲状腺激素对碘摄取的刺激作用。HGF同时能促进受损心肌中心脏干细胞的活力

。血清HGF含量的升高能够反映出肝损伤
、急性肾功能衰竭

、心肌梗死、I型糖尿病

、肥胖以及癌症等多种疾病。

检测原理:

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中HGF的浓度。HGF捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时，其中的HGF会与捕获抗体结合
，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去
。当加入生物素化的抗人HGF抗体后
，抗人HGF抗体与HGF接合

，形成夹心的免疫复合物，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。生物素与亲合素特异性结合，亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来



；其它游离的成分通过洗涤的过程被除去

。最后加入显色剂，若样本中存在HGF将会形成免疫复合物

，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质
，在加入终止液后呈黄色



。通过酶标仪检测
，读其450nm处的OD值

，HGF浓度与OD450值之间呈正比


，通过参考品绘制标准曲线

，对照未知样本中OD值
，即可算出标本中HGF浓度。

人HGF定量分析酶联免疫检测试剂盒组成:

标本收集:

1.标本的收集请按下列流程进行操作

；

A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可

；

B.血清标本应是自然凝固后


，取上清，避免在冰箱中凝固血液

；

C.血浆标本，推荐用EDTA的方法收集
，不能使用肝素钠抗凝剂；

D.若待测样本不能及时检测，标本收集后请分装，冻存于－20℃，避免反复冻融。

2.血清标本不应添加任何防腐剂或抗凝剂；

3.标本应清澈透明，检测前样本中如有悬浮物应通过离心去除






。

4.请勿使用溶血，高血脂或污染的标本检测




，否则结果将不准确

。

注：人血清或血浆样本请用样本分析缓冲液做倍比稀释后再检测。

注意事项:

1.试剂盒请保存在2～8℃。

2.浓缩洗涤液因在低温下可能有结晶
，请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。

3.标准品复溶加样后
，剩余部份请丢弃
。

4.底物请勿接触氧化剂和金属
。

5.加样时
，请及时更换枪头，避免交叉污染。

6.严禁混用不同批号的试剂盒组份





。

7.充分混匀对保证反应结果的准性很重要，在加液后请轻轻叩击边缘以保证混匀。

8.室温反应，请严格控制在25～28℃

。

9.洗涤过程是至关重要的
，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。

10.试验中标准品和样本检测时建议作双复孔
。

11.加样过程中避免气泡的产生。

12.血清和血浆标本的检测时
，检测抗体的孵育时间应适当延长。

检测前准备工作: 

1.试剂盒自冰箱中取出后应置室温（25-28℃）平衡20分钟；每次检测后剩余试剂请及时于2～8℃保存。

2.将浓缩洗涤液用双蒸水或去离子水稀释(1份加19份水)
。

3.如有5x标准品稀释液

，请按所需量用双蒸水或去离子水稀释(1份加4份水)。

4.标准品: 按标签复溶体积加入pH值11.7的缓冲液复溶使HGF终浓度达到8000pg/ml
，室温反应

，请严格控制在25～28℃


，静置15~20分钟后轻轻混悬（建议抽吸几次）待彻底溶解
，用标准品稀释液倍比梯度稀释后依次加入检测孔中

。（标准曲线取七个点
，最高浓度为8000 pg/ml,标准品稀释液直接加入作为0浓度.）

洗涤方法:

自动洗板机或人工洗板：每孔洗涤液为300ul，注入与吸出间隔15-30秒
。洗板5次



。最后一次洗板完成后将板倒扣着在厚吸水纸上用力拍干。

实验过程需自备的材料：

1.不同规格的加样枪及相应的枪头；   

2.酶标仪

；

3.自动洗板机；                     

4.去离子水或双蒸水；

操作步骤:

1.通过计算并确定一次性实验所需的板条数，取出所需板条放置在框架内
，暂时用不到板条请放回铝箔袋密封
，保存于4℃。

2.建议设置本底较正孔，即空白孔,设置方法为该孔只加TMB显色液和中止液
。每次实验均需做标准品对照并画出标准曲线


。

3.分别将标本或不同浓度标准品(100ul/孔)加入相应孔中
，用封板胶纸封住反应孔
，室温（25-28℃）孵育120分钟




。对于血清或血浆标本
，请加入50 ul样本分析缓冲液后加50 ul标本

，如稀释量大
，请将样本与样本分析缓冲液等量加入

，不足部分用标准品稀释液补充至100ul

。     

4.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干
。

5.加入生物素化抗体工作液(100ul/孔)

。用封板胶纸封住反应孔
，室温（25-28℃）孵育60分钟





。    

6.洗板5次


，且最后一次置厚吸水纸上拍干。

7.加入亲和素连接的HRP酶工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔，避光室温（25-28℃）孵育20分钟


。

8.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干




。

9.加入显色剂TMB100ul/孔，避光室温（25-28℃）孵育20分钟。

10.加入中止液50ul/孔,混匀后即刻测量OD450值





。

结果判断:

1.复孔的值在20%的差异范围内结果才有效

，复孔的值平均后可作为测量值

。

2.每个标准品或标本的OD值应减去本底校正孔的OD值
。

3.手工绘制标准曲线
。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点



。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度
。

4.若标本OD值高于标准曲线上限



，应适当稀释后重测
，计算浓度时应乘以稀释倍数

。

典型数值和参考曲线

人HGF参考标准曲线

注意
：本图仅供参考





，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算标本含量

。

灵敏度




，特异性和重复性:

1.灵敏度
：多次重复结果表明
，最小检出量为112.7pg/ml
。

2.特异性：与人EGF 
、G-CSF 、GM-CSF 

、HGF R 

、M-CSF 


、PDGF-AA


、PDGF-AB 、PDGF-BB 、TGF-β1 
、VEGF及小鼠HGF等没有交叉反应
。

3.重复性



：板内，板间变异系数均<10%.

参考文献:

1. Vessely, D. et al. (2004) Physiol. Res. 53:83.

2. Grzelakowska-Sztabert, B. and M. Dudkowska (2011) Growth Factors 4:105.

3. Rutella, S. et al. (2006) Blood 108:218.

4. Lesko, E. and M. Majka (2008) Front. Biosesci. 13:1271.

5. Sisson, T.H. et al. (2009) Blood 114:5052.