人的巨噬细胞炎性蛋白1αELISA试剂盒Human CCL3/MIP-1αELISA KIT - 人ELISA试剂盒 - 细胞冻存液|胎牛血清|细胞株|细胞培养基|ELISA试剂盒|ECL发光液|国产血清|澳洲血清|完全培养基-上海尊龙凯时人生就是搏生物科技有限公司
申请试用装
您当前的位置  :首页 > 产品中心 > ELISA试剂盒 > 人ELISA试剂盒
人的巨噬细胞炎性蛋白1αELISA试剂盒Human CCL3/MIP-1αELISA KIT
货号    :HH-66
价格  :¥3800.00
加入购物车 ,提交订单信息之后  ,尊龙凯时人生就是搏会第一时间与您取得联系 !
  • 产品信息
  • 产品说明(可下载)
  • 参考文献
  • 常见问题

巨噬细胞炎性蛋白1阿尔法定量分析酶联免疫检测试剂盒

 

本试剂盒仅供科研使用 。用于体外定量检测人血清 、血浆或细胞培养上清液中的CCL3浓度。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分是否完整 。如有产品包装破损或质量投拆 ,请在收到货一个月之内联系尊龙凯时人生就是搏 。

 

CCL3简介:

CCL3      ,也叫巨噬细胞炎性蛋白MIP-1α属于趋化因子CC家族的成员  。MIP-1α的基因与其它b族趋化因子家族基因一样,都位于17号染色体上     。人的MIP-1α的DNA编码92个氨基酸的前体蛋白,经过裂解为成熟的MIP-1α蛋白和一个22个氨基酸的信号肽 。

MIP-1α一般由活化的T细胞 、B细胞 、单核细胞     、肥大细胞 、中性粒细胞   、朗格汉斯细胞、星型胶质细胞  、内皮细胞   、成纤维细胞和平滑肌细胞等产生分泌。

MIP-1α在免疫调控和炎症反应过程中起重要作用。MIP-1α能特别对CD8+ T细胞以及单核细胞、巨噬细胞 、树枝状细胞等起化学引诱和趋化作用   。除了趋化性外 ,MIP-1α还具有诱异炎症细胞因子的分泌 ,肥大细胞的降解以及NK细胞的活化等作用。也有报道MIP-1α能够抑制造血干细胞的分化 ,有效地维持这类干细胞的去分化状态 。

 

检测原理:

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中CCL3的浓度。CCL3捕获抗体已预包被于酶标板上 ,当加入标本或参考品时,其中的CCL3会与捕获抗体结合,其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。当加入生物素化的抗人CCL3抗体后  ,抗人CCL3抗体与CCL3接合,形成夹心的免疫复合物,其它游离的成分通过洗涤的过程被除去 。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素  。生物素与亲合素特异性结合    ,亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来 ;其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。最后加入显色剂  ,若样本中存在CCL3将会形成免疫复合物 ,辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质,在加入终止液后呈黄色 。通过酶标仪检测  ,读其450nm处的OD值,CCL3浓度与OD450值之间呈正比  ,通过参考品绘制标准曲线,对照未知样本中OD值,即可算出标本中CCL3浓度 。

 

CCL3定量分析酶联免疫检测试剂盒组成:

组分

规格(96T/48T)

CCL3预包被板

12条/6

5×标准品稀释液

10ml/5ml

CCL3标准品

2支/1支(冻干)

CCL3生物素化抗体

10ml/5ml

亲和素连接的HRP酶

10ml/5ml

浓缩洗涤液 20×

30ml/15ml

TMB底物

10ml/5ml

中止液

5ml/3ml

封板胶纸

3/2

说明书

1

标本收集:

1.标本的收集请按下列流程进行操作  ;

A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可 ;

B.血清标本应是自然凝固后 ,取上清 ,避免在冰箱中凝固血液 ;

C.血浆标本 ,推荐用EDTA的方法收集

D.若待测样本不能及时检测 ,标本收集后请分装 ,冻存于-20℃ ,避免反复冻融   。

2.血清标本不应添加任何防腐剂或抗凝剂;

3.标本应清澈透明 ,检测前样本中如有悬浮物应通过离心去除 。

4.请勿使用溶血,高血脂或污染的标本检测,否则结果将不准确 。

注意事项:

1.试剂盒请保存在28℃ 。

2.浓缩洗涤液因在低温下可能有结晶 ,请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液   。

3.标准品复溶加样后,剩余部份请丢弃 。

4.底物请勿接触氧化剂和金属   。

5.加样时,请及时更换枪头  ,避免交叉污染     。

6.严禁混用不同批号的试剂盒组份 。

7.充分混匀对保证反应结果的准性很重要       ,在加液后请轻轻叩击边缘以保证混匀  。

8.室温反应 ,请严格控制在25~28℃ 。

9.洗涤过程是至关重要的  ,洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大    。

10.试验中标准品和样本检测时建议作双复孔。

11.加样过程中避免气泡的产生。

12.血清和血浆标本的检测时,检测抗体的孵育时间应适当延长。

 

检测前准备工作:

 1.试剂盒自冰箱中取出后应置室温(25-28℃)平衡20分钟 ;每次检测后剩余试剂请及时于2~8℃保存 。

2.将浓缩洗涤液用双蒸水或去离子水稀释(1份加19份水) 。

3.如有5X准品稀释液 ,请按所需量用双蒸水或去离子水稀释(1份加4水) 。

4.标准品: 按标签复溶体积加入1X标准品稀释液复溶使CCL3终浓度达到500pg/ml    ,室温反应,请严格控制在25~28℃ ,静置15~20分钟后轻轻混悬(建议抽吸几次)待彻底溶解 ,用标准品稀释液倍比梯度稀释后依次加入检测孔中 。(标准曲线取七个点 ,最高浓度为500 pg/ml,标准品稀释液直接加入作为0浓度.)

图片2.png 

洗涤方法:

自动洗板机或人工洗板 :每孔洗涤液为300ul,注入与吸出间隔15-30秒 。洗板5次。最后一次洗板完成后将板倒扣着在厚吸水纸上用力拍干。

 

实验过程需自备的材料  :

1.不同规格的加样枪及相应的枪头  ;   

2.酶标仪 ;

3.自动洗板机 ;                     

4.去离子水或双蒸水 ;

 

操作步骤:

1.通过计算并确定一次性实验所需的板条数   ,取出所需板条放置在框架内 ,暂时用不到板条请放回铝箔袋密封 ,保存于4℃     。

2.建议设置本底较正孔   ,即空白孔,设置方法为该孔只加TMB显色液和中止液 。每次实验均需做标准品对照并画出标准曲线 。

3.分别将标本或不同浓度标准品(100ul/孔)加入相应孔中,用封板胶纸封住反应孔 ,室温(25-28℃)孵育120分钟   。对于血清样本的稀释倍数一般2~15倍稀释,如无准确稀释范围,从2倍开始稀释 。细胞上清需根据实验结果 ,如果超过试剂盒的检测限  ,请相应稀释后再检测。

4.洗板5次 ,且最后一次置厚吸水纸上拍干。

5.加入生物素化抗体工作液(100ul/)。用封板胶纸封住反应孔 ,室温(25-28℃)孵育60分钟   。    

6.洗板5次,且最后一次置厚吸水纸上拍干。

7.加入亲和素连接的HRP酶工作液(100ul/) 。用封板胶纸封住反应孔 ,避光室温(25-28℃)孵育20分钟  。

8.洗板5次 ,且最后一次置厚吸水纸上拍干。

9.加入显色剂TMB100ul/孔 ,避光室温(25-28℃)孵育20分钟 。

10.加入中止液50ul/孔,混匀后即刻测量OD450值     。

 

结果判断:

1.复孔的值在20%的差异范围内结果才有效 ,复孔的值平均后可作为测量值 。

2.每个标准品或标本的OD值应减去本底校正孔的OD值 。

3.手工绘制标准曲线  。以标准品浓度作横坐标 ,OD值作纵坐标  ,以平滑线连接各标准品的坐标点 。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。

4.若标本OD值高于标准曲线上限      ,应适当稀释后重测 ,计算浓度时应乘以稀释倍数 。

典型数值和参考曲线

浓度pg/ml

典型OD1

典型OD2

OD平均值

0

0.114

0.098

0.106

15.625

0.253

0.195

0.224

31.25

0.386

0.318

0.352

62.5

0.612

0.494

0.553

125

1.036

0.932

0.984

250

1.623

1.465

1.544

500

2.342

2.166

2.254

CCL3 参考标准曲线

图片1.png 


意 :本图仅供参考,应以同次试验标准品所绘标准曲线计算标本含量。

 


灵敏度,特异性和重复性:

1.灵敏度 :多次重复结果表明,最小检出量为4.6pg/ml。

2.特异性     :与人的MCP-1、EGF     、ENA-78 、G-CSF、GM-CSF  、IL-1α、IL-1β     、IL-6及小鼠的CCL3无交叉反应性。

3.重复性:板内  ,板间变异系数均<10%.

 

参考文献:

1. Kelner, G.S. and A. Zlotnik (1995) J. Leuk. Biol. 57:778.

2. Graham, G.J. et al. (1993) Cell Growth Diff. 4:137.

3. Lukacs, N.W. et al. (1994) Am. J. Pathol. 144:711.

4. Koch, A.E. et al. (1994) J. Clin. Invest. 93:921.

5. Cocchi, F. et al. (1995) Science 270:1811.

6. Schall, T.J. et al. (1993) J. Exp. Med. 177:1821.


相关产品
货号 产品名称 规格 价格 指令
HH-66 人的巨噬细胞炎性蛋白1αELISA试剂盒Human CCL3/MIP-1αELISA KIT 96T ¥3800.00 放入购物车 》
公司简介 / Company profile
上海尊龙凯时人生就是搏生物科技有限公司
Shanghai Chuan Qiu Biotechnology Co.,Ltd.
       公司主要依托复旦大学、同济大学等上海地区多家著名高校  ,拥有一支富有经验的开发团队 ,专业从事细胞及细胞...
Copyright © 2018 CHUANQIU Biotechnology Co.,Ltd. All Rights Reserved. 沪ICP备18030131号-1
  • 申请试用装
  • 021-69950217

  • 网站地图