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人的成纤维生长因子23ELISA试剂盒Human FGF-23 ELISA KIT
货号    :HH-44
价格 :¥4200.00/2600.00.00
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人的成纤维生长因子23定量分析酶联免疫检测试剂盒

 

本试剂盒仅供科研使用。用于体外定量检测人血清   、血浆或细胞培养上清液中的FGF-23 浓度    。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分是否完整    。如有产品包装破损或质量投拆,请在收到货一个月之内联系尊龙凯时人生就是搏。

 

FGF-23简介   :

成纤维生长因子23FGF-23)属于FGF家族的成员之一 ,基于其结构  ,可细分为属于FGF-19亚类      。FGF-23前体有209个氨基酸构成 ,包括28个氨基酸的信号肽,FGF-23成熟蛋白有181个氨基酸。

FGF-23 由肝细胞应对游离脂肪酸形成的PPARα/RXR二聚体的刺激而产生的。在脂肪组织,FGF-23可与PPARγ协同作用增加葡萄糖载体GLUT1,从而使葡萄糖水平升高     。FGF-23 还参与了许多其它的生理过程,包括胚胎发育    、细胞生长 、形态发生、组织修复、肿瘤生长与侵袭等。

 

检测原理:

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中FGF-23的浓度   。FGF-23捕获抗体已预包被于酶标板上,当加入标本或参考品时 ,其中的FGF-23会与捕获抗体结合,其它游离的成分通过洗涤的过程被除去 。当加入生物素化的FGF-23抗体后  ,抗FGF-23抗体与FGF-23接合,形成夹心的免疫复合物,其它游离的成分通过洗涤的过程被除去 。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素     。生物素与亲合素特异性结合,亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来;其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。最后加入显色剂 ,若样本中存在FGF-23将会形成免疫复合物 ,辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质  ,在加入终止液后呈黄色    。通过酶标仪检测  ,读其450nm处的OD值 ,FGF-23浓度与OD450值之间呈正比,通过参考品绘制标准曲线,对照未知样本中OD值,即可算出标本中FGF-23浓度 。

 

FGF-23定量分析酶联免疫检测试剂盒组成:

组分

规格(96T/48T)

FGF-23预包被板

12条/6

5×标准品稀释液

10ml/5ml

FGF-23标准品

2支/1支(冻干)

FGF-23生物素化抗体

10ml/5ml

亲和素连接的HRP酶

10ml/5ml

浓缩洗涤液 20×

30ml/15ml

TMB底物

10ml/5ml

中止液

5ml/3ml

封板胶纸

3/2

说明书

1

 

标本收集:

1.标本的收集请按下列流程进行操作;

A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可;

B.血清标本应是自然凝固后   ,取上清     ,避免在冰箱中凝固血液;

C.血浆标本 ,推荐用EDTA的方法收集 ;

D.若待测样本不能及时检测 ,标本收集后请分装  ,冻存于-20℃ ,避免反复冻融 。

2.血清标本不应添加任何防腐剂或抗凝剂 ;

3.标本应清澈透明 ,检测前样本中如有悬浮物应通过离心去除。

4.请勿使用溶血 ,高血脂或污染的标本检测  ,否则结果将不准确    。

 

注意事项:

1.试剂盒请保存在28℃   。

2.浓缩洗涤液因在低温下可能有结晶 ,请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。

3.标准品复溶加样后,剩余部份请丢弃 。

4.底物请勿接触氧化剂和金属   。

5.加样时,请及时更换枪头        ,避免交叉污染。

6.严禁混用不同批号的试剂盒组份。

7.充分混匀对保证反应结果的准性很重要  ,在加液后请轻轻叩击边缘以保证混匀     。

8.室温反应,请严格控制在25-28℃。

9.洗涤过程是至关重要的,洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大 。

10.试验中标准品和样本检测时建议作双复孔 。

11.加样过程中避免气泡的产生。

12.血清和血浆标本的检测时,检测抗体的孵育时间应适当延长

 

检测前准备工作: 

1.试剂盒自冰箱中取出后应置室温(25-28℃)平衡20分钟;每次检测后剩余试剂请及时于2~8℃保存  。

2.将浓缩洗涤液用双蒸水或去离子水稀释(1份加19份水)        。

3.如有5X准品稀释液 ,请按所需量用双蒸水或去离子水稀释(1份加4水) 。

4.标准品: 按标签复溶体积加入1X标准品稀释液复溶使FGF-23终浓度达到5000pg/ml  ,室温反应,请严格控制在25~28℃,静置15~20分钟后轻轻混悬(建议抽吸几次)待彻底溶解,用标准品稀释液倍比梯度稀释后依次加入检测孔中。(标准曲线取七个点,最高浓度为5000pg/ml,标准品稀释液直接加入作为0 浓度.图片2.png

洗涤方法:

自动洗板机或人工洗板 :每孔洗涤液为300ul  ,注入与吸出间隔15-30秒。洗板5次。最后一次洗板完成后将板倒扣着在厚吸水纸上用力拍干。

 

实验过程需自备的材料:

1.不同规格的加样枪及相应的枪头 ;   

2.酶标仪 ;

3.自动洗板机;                     

4.去离子水或双蒸水;

 

操作步骤:

1.通过计算并确定一次性实验所需的板条数  ,取出所需板条放置在框架内,暂时用不到板条请放回铝箔袋密封,保存于4℃ 。

2.建议设置本底较正孔   ,即空白孔,设置方法为该孔只加TMB显色液和中止液 。每次实验均需做标准品对照并画出标准曲线 。

3.分别将标本或不同浓度标准品(100ul/)加入相应孔中  ,用封板胶纸封住反应孔 ,室温(25-28℃)孵育120分钟 。不同样本中PAI-1含量不一样   ,试剂盒用来检测血清样本的稀释倍数一般2~30倍稀释 ,如果无明确范围 ,需提前预实验 ,如果超出检测范围,应用标准品稀释液稀释后重新检测    。

4.洗板5次  ,且最后一次置厚吸水纸上拍干  。

5.加入生物素化抗体工作液(100ul/) 。用封板胶纸封住反应孔,室温(25-28℃)孵育60分钟   。   

6.洗板5次,且最后一次置厚吸水纸上拍干。

7.加入亲和素连接的HRP酶工作液(100ul/)   。用封板胶纸封住反应孔 ,避光室温(25-28℃)孵育20分钟 。

8.洗板7次   ,且最后一次置厚吸水纸上拍干 。

9.加入显色剂TMB100ul/孔,避光室温(25-28℃)孵育20分钟 。

10.加入中止液50ul/,混匀后即刻测量OD450值。

 

 

 

 

结果判断:

1.复孔的值在20%的差异范围内结果才有效 ,复孔的值平均后可作为测量值。

2.每个标准品或标本的OD值应减去本底校正孔的OD值。

3.手工绘制标准曲线  。以标准品浓度作横坐标,OD值作纵坐标  ,以平滑线连接各标准品的坐标点 。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度   。

4.若标本OD值高于标准曲线上限 ,应适当稀释后重测,计算浓度时应乘以稀释倍数 。

 

典型数值和参考曲线

浓度pg/ml

典型OD1

典型OD2

OD平均值

0

0.082

0.106

0.094

156.25

0.219

0.287

0.253

312.5

0.421

0.485

0.453

625

0.689

0.761

0.725

1250

1.005

1.083

1.044

2500

1.46

1.512

1.486

5000

1.998

2.226

2.112

FGF-23参考标准曲线

图片1.png 

 

注意:本图仅供参考 ,应以同次试验标准品所绘标准曲线计算标本含量。

 

灵敏度   ,特异性和重复性:

1.灵敏度     :多次重复结果表明    ,最小检出量为42.5pg/ml 。

2.特异性:与人的FGF R1α 、FGF R2α    、FGF R3   、FGF R4无交叉反应性  ,与小鼠的FGF230.5%的交叉反应性 。

3.重复性:板内 ,板间变异系数均<10%.

 

参考文献:

1. Huang, X. et al. (2006) Mol. Carcinog. 45:934.

2. Urakawa, I. et al. (2006) Nature 444:770.

3. Kurosu, H. et al. (2007) J. Biol. Chem. 282:26687.

4. Mohammadi, M. et al. (2005) Cytokine Growth Factor Rev. 16:107.

5. Shimada, T. et al. (2001) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 98:6500.

6. Moore, D.D. (2007) Science 316:1436.


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       公司主要依托复旦大学 、同济大学等上海地区多家著名高校 ,拥有一支富有经验的开发团队 ,专业从事细胞及细胞...
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