产品说明(可下载)人的白细胞介素23定量分析酶联免疫检测试剂盒
本试剂盒仅供科研使用 。用于体外定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的IL-23浓度 。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分是否完整 。如有产品包装破损或质量投拆，请在收到货一个月之内联系尊龙凯时人生就是搏。
IL-23简介 ：
白介23是通过二硫键连接IL-12的一个亚结构P40和亚结构P19蛋白形成的异源二聚体 。IL-23的P19亚结构与P40亚结构都是属于IL-6超家族的分泌蛋白。人的P19亚基由189个氨基酸的前体经加工去掉19个亚基的信号肽后形成的 ，成熟的P19亚基由170个氨基酸 。
虽然P19亚基由活化的巨噬细胞 、树突状细胞 、T细胞和内皮细胞表达分泌，但只有活化的巨噬细胞、树突状细胞同时能表达P40亚基而形成有活性的IL-23 。
IL-23与IL-12有类似与不同的生物活性。无论IL-23与IL-12都能诱导人的T细胞的增殖和 IFNγ 的产生 。小鼠的IL-23可强烈引起记忆性T细胞的增殖 ，但不能诱导幼稚T细胞的增殖，而IL-12对记忆性T细胞则没有此效果。此外 ，IL-23能刺激记忆性T细胞产生炎性细胞因子IL-17 ，但IL-12则不能 。
检测原理:
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中IL-23的浓度 。IL-23捕获抗体已预包被于酶标板上 ，当加入标本或参考品时 ，其中的IL-23会与捕获抗体结合 ，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。当加入生物素化的抗人IL-23抗体后 ，抗人IL-23抗体与IL-23接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去 。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素 。生物素与亲合素特异性结合，亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来；其它游离的成分通过洗涤的过程被除去 。最后加入显色剂 ，若样本中存在IL-23将会形成免疫复合物，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质 ，在加入终止液后呈黄色 。通过酶标仪检测 ，读其450nm处的OD值 ，IL-23浓度与OD450值之间呈正比 ，通过参考品绘制标准曲线 ，对照未知样本中OD值 ，即可算出标本中IL-23浓度 。
人IL-23定量分析酶联免疫检测试剂盒组成:
组分 | 规格（96T/48T） |
人IL-23预包被板 | 12条/6条 |
样本分析缓冲液 | 5ml/3ml |
标准品稀释液 | 10ml/5ml |
人IL-23标准品 | 2支/1支(冻干) |
人IL-23生物素化抗体 | 10ml/5ml |
亲和素连接的HRP酶 | 10ml/5ml |
浓缩洗涤液 20× | 30ml/15ml |
TMB底物 | 10ml/5 ml |
中止液 | 5ml/3 ml |
封板胶纸 | 3/2张 |
说明书 | 1份 |
标本收集:
1.标本的收集请按下列流程进行操作 ；
A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可 ；
B.血清标本应是自然凝固后，取上清，避免在冰箱中凝固血液 ；
C.血浆标本 ，推荐用EDTA的方法收集若待测样本不能及时检测 ，
D.标本收集后请分装 ，冻存于－20℃ ，避免反复冻融 。
2.血清标本不应添加任何防腐剂或抗凝剂 ；
3.标本应清澈透明，检测前样本中如有悬浮物应通过离心去除。
4.请勿使用溶血 ，高血脂或污染的标本检测 ，否则结果将不准确。
注：人血清或血浆样本请用样本分析缓冲液做倍比稀释后再检测 。
注意事项:
1.试剂盒请保存在2～8℃。
2.浓缩洗涤液因在低温下可能有结晶 ，请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液 。
3.标准品复溶加样后 ，剩余部份请丢弃 。
4.底物请勿接触氧化剂和金属。
5.加样时，请及时更换枪头 ，避免交叉污染 。
6.严禁混用不同批号的试剂盒组份。
7.充分混匀对保证反应结果的准性很重要 ，在加液后请轻轻叩击边缘以保证混匀 。
8.室温反应 ，请严格控制在25～28℃ 。
9.洗涤过程是至关重要的 ，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大 。
10.试验中标准品和样本检测时建议作双复孔 。
11.加样过程中避免气泡的产生。
12 .血清和血浆标本的检测时 ，检测抗体的孵育时间应适当延长 。
检测前准备工作:
1.试剂盒自冰箱中取出后应置室温（25～28℃）平衡20分钟；每次检测后剩余试剂请及时于2～8℃保存。
2.将浓缩洗涤液用双蒸水或去离子水稀释(1份加19份水) 。
3.如有5X准品稀释液，请按所需量用双蒸水或去离子水稀释(1份加4水)。
4.标准品: 按标签复溶体积加入标准品稀释液复溶使IL-23终浓度达到2000pg/ml，室温反应 ，请严格控制在25～28℃ ，静置15~20分钟后轻轻混悬（建议抽吸几次）待彻底溶解 ，用标准品稀释液倍比梯度稀释后依次加入检测孔中。（标准曲线取七个点 ，最高浓度为2000 pg/ml,标准品稀释液直接加入作为0浓度.）
洗涤方法:
自动洗板机或人工洗板：每孔洗涤液为300ul ，注入与吸出间隔15-30秒 。洗板5次 。最后一次洗板完成后将板倒扣着在厚吸水纸上用力拍干。
实验过程需自备的材料：
1.不同规格的加样枪及相应的枪头 ；
2.酶标仪 ；
3.自动洗板机 ；
4.去离子水或双蒸水 ；
操作步骤:
1.通过计算并确定一次性实验所需的板条数 ，取出所需板条放置在框架内，暂时用不到板条请放回铝箔袋密封 ，保存于4℃ 。
2.建议设置本底较正孔，即空白孔,设置方法为该孔只加TMB显色液和中止液。每次实验均需做标准品对照并画出标准曲线。
3.分别将标本或不同浓度标准品(100ul/孔)加入相应孔中 ，用封板胶纸封住反应孔，室温（25～28℃）孵育120分钟 。对于血清或血浆标本 ，请加入50 ul样本分析缓冲液后加50 ul标本, 如稀释量大，请将样本与样本分析缓冲液等量加入 ，不足部分用标准品稀释液补充至100ul。
4.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。
5.加入生物素化抗体工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔 ，室温（25～28℃）孵育60分钟 。
6.洗板5次 ，且最后一次置厚吸水纸上拍干。
7.加入亲和素连接的HRP酶工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔 ，避光室温（25～28℃）孵育20分钟。
8.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。
9.加入显色剂TMB100ul/孔，避光室温（25～28℃）孵育20分钟。
10.加入终止液50ul/孔,混匀后即刻测量OD450值。
结果判断:
1.复孔的值在20%的差异范围内结果才有效 ，复孔的值平均后可作为测量值。
2.每个标准品或标本的OD值应减去本底校正孔的OD值。
3.手工绘制标准曲线 。以标准品浓度作横坐标 ，OD值作纵坐标 ，以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。
4.若标本OD值高于标准曲线上限 ，应适当稀释后重测 ，计算浓度时应乘以稀释倍数 。
典型数值和参考曲线
浓度pg/ml | 典型OD值1 | 典型OD值2 | OD平均值 |
0 | 0.0845 | 0.1143 | 0.0994 |
62.5 | 0.2661 | 0.2951 | 0.2806 |
125 | 0.4296 | 0.467 | 0.4483 |
250 | 0.7635 | 0.7835 | 0.7735 |
500 | 1.2203 | 1.2399 | 1.2301 |
1000 | 1.7987 | 1.8315 | 1.8151 |
2000 | 2.6475 | 2.6567 | 2.6521 |
人IL-23参考标准曲线
注意：本图仅供参考 ，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算标本含量。
灵敏度 ，特异性和重复性:
1.灵敏度 ：多次重复结果表明，最小检出量为19.2pg/ml。
2.特异性 ：与人的IL-12，IL-12P35,IL-12p40dimer，il-12p40 monomer和小鼠的IL-23、IL-12 、IL-12 p35等没有交叉反应 。
3.重复性 ：板内，板间变异系数均<10%.
参考文献:
1. Bettelli, E. et al. (2006) Nature 441:235.
2. Langowski, J.L. et al. (2006) Nature 442:461.
3. Aggarwal, S. et al. (2003) J. Biol. Chem. 278:1910.
4. Nakae, S. et al. (2003) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 100:5986.
5. Fuss, I.J. et al. (2006) Inflamm. Bowel Dis. 12:9.
6. Veldhoen, M. et al. (2006) Immunity 24:179.
7. Wiekowski, M.T. et al. (2001) J. Immunol. 166:7563.
8. Piskin, G. et al. (2006) J. Immunol. 176:1908.
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