产品说明(可下载)人白细胞介素21定量分析酶联免疫检测试剂盒
本试剂盒仅供科研使用。用于体外定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的IL-21浓度 。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分是否完整。如有产品包装破损或质量投拆 ，请在收到货一个月之内联系尊龙凯时人生就是搏。
IL-21简介：
人的IL-21是一个CD4+细胞应对抗原刺激而产生的131个氨基酸残基的蛋白 。它的主要作用是提升免疫细胞对特异性抗原的应答反应。IL-21的主要生物作用包括依赖T细胞的血浆B细胞和记忆性B细胞的诱导，与IL-4共同刺激产生IgG的产生 ，诱导B细胞的调亡和B细胞在缺乏T细胞信号时的产生 。由IL-6介导的IL-21的产生刺激T细胞的过程是依赖STAT3途径而非ROR-gamma途径 。
检测原理:
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中IL-21的浓度 。IL-21捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时，其中的IL-21会与捕获抗体结合，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去 。当加入生物素化的抗人IL-21抗体后 ，抗人IL-21抗体与IL-21接合 ，形成夹心的免疫复合物，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。生物素与亲合素特异性结合 ，亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来 ；其它游离的成分通过洗涤的过程被除去 。最后加入显色剂 ，若样本中存在IL-21将会形成免疫复合物，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色 。通过酶标仪检测 ，读其450nm处的OD值 ，IL-21浓度与OD450值之间呈正比 ，通过参考品绘制标准曲线，对照未知样本中OD值，即可算出标本中IL-21浓度。
人IL-21定量分析酶联免疫检测试剂盒组成:
组分 | 规格（96T/48T） |
人IL-21预包被板 | 12条/6条 |
样本分析缓冲液 | 5ml/3ml |
标准品稀释液 | 10ml/5ml |
人IL-21标准品 | 2支/1支(冻干)* |
人IL-21生物素化抗体 | 10ml/5ml |
HRP连接的酶结合物 | 10ml/5ml |
浓缩洗涤液 20× | 30ml/15ml |
TMB底物 | 10ml/5ml |
中止液 | 5ml/3ml |
封板胶纸 | 3/2张 |
说明书 | 1份 |
标本收集:
1.标本的收集请按下列流程进行操作 ；
A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可；
B.血清标本应是自然凝固后 ，取上清 ，避免在冰箱中凝固血液；
C.血浆标本 ，推荐用EDTA的方法收集若待测样本不能及时检测，
D.标本收集后请分装，冻存于－20℃ ，避免反复冻融。
2.血清标本不应添加任何防腐剂或抗凝剂 ；
3.标本应清澈透明 ，检测前样本中如有悬浮物应通过离心去除。
4.请勿使用溶血 ，高血脂或污染的标本检测，否则结果将不准确 。
注 ：人血清或血浆样本请用样本分析缓冲液做倍比稀释后再检测 。
注意事项:
1.试剂盒请保存在2～8℃。
2.浓缩洗涤液因在低温下可能有结晶，请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液 。
3.标准品复溶加样后 ，剩余部分请丢弃 。
4.底物请勿接触氧化剂和金属。
5.加样时 ，请及时更换枪头 ，避免交叉污染。
6.严禁混用不同批号的试剂盒组份。
7.充分混匀对保证反应结果的准性很重要 ，在加液后请轻轻叩击边缘以保证混匀。
8.室温反应 ，请严格控制在25～28℃。
9.洗涤过程是至关重要的，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
10.试验中标准品和样本检测时建议作双复孔 。
11.加样过程中避免气泡的产生 。
12.血清和血浆标本的检测时 ，检测抗体的孵育时间应适当延长。
检测前准备工作:
1.试剂盒自冰箱中取出后应置室温（25～28℃）平衡20分钟；每次检测后剩余试剂请及时于2～8℃保存 。
2.将浓缩洗涤液用双蒸水或去离子水稀释(1份加19份水) 。
3.如有5X准品稀释液 ，请按所需量用双蒸水或去离子水稀释(1份加4水) 。
4.标准品: 按标签复溶体积加入标准品稀释液复溶使IL-21终浓度达到1000pg/ml，室温反应 ，请严格控制在25～28℃ ，静置15~20分钟后轻轻混悬（建议抽吸几次）待彻底溶解，用标准品稀释液倍比梯度稀释后依次加入检测孔中 。（标准曲线取七个点 ，最高浓度为1000pg/ml,标准品稀释液直接加入作为0浓度.）
洗涤方法:
自动洗板机或人工洗板 ：每孔洗涤液为300ul ，注入与吸出间隔15-30秒。洗板5次。最后一次洗板完成后将板倒扣着在厚吸水纸上用力拍干 。
实验过程需自备的材料 ：
1.不同规格的加样枪及相应的枪头 ；
2.酶标仪 ；
3.自动洗板机；
4.去离子水或双蒸水；
操作步骤:
1.通过计算并确定一次性实验所需的板条数 ，取出所需板条放置在框架内，暂时用不到板条请放回铝箔袋密封，保存于4℃。
2.建议设置本底较正孔 ，即空白孔,设置方法为该孔只加TMB显色液和中止液 。每次实验均需做标准品对照并画出标准曲线。
3.分别将标本或不同浓度标准品(100ul/孔)加入相应孔中，用封板胶纸封住反应孔 ，室温（25～28℃）孵育120分钟。对于血清或血浆标本 ，请加入50 ul样本分析缓冲液后加50 ul标本 ，如稀释量大 ，请将样本与样本分析缓冲液等量加入 ，不足部分用标准品稀释液补充至100ul。
4.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干 。
5.加入生物素化抗体工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔 ，室温（25～28℃）孵育60分钟 。
6.洗板5次 ，且最后一次置厚吸水纸上拍干。
7.加入亲和素连接的HRP酶工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔 ，避光室温（25～28℃）孵育20分钟 。
8.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干 。
9.加入显色剂TMB100ul/孔 ，避光室温（25～28℃）孵育20分钟。
10.加入终止液50ul/孔,混匀后即刻测量OD450值。
结果判断:
1.复孔的值在20%的差异范围内结果才有效 ，复孔的值平均后可作为测量值。
2.每个标准品或标本的OD值应减去本底校正孔的OD值 。
3.手工绘制标准曲线 。以标准品浓度作横坐标 ，OD值作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点 。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度 。
4.若标本OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数 。
典型数值和参考曲线
浓度pg/ml | 典型OD值1 | 典型OD值2 | OD平均值 |
0 | 0.1306 | 0.1152 | 0.1229 |
31.25 | 0.3242 | 0.3272 | 0.3257 |
62.5 | 0.4936 | 0.4718 | 0.4827 |
125 | 0.8019 | 0.7363 | 0.7691 |
250 | 1.1392 | 1.041 | 1.0901 |
500 | 1.6399 | 1.4991 | 1.5695 |
1000 | 2.2298 | 2.1086 | 2.1692 |
人IL-21参考标准曲线
注意：本图仅供参考，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算标本含量 。
灵敏度 ，特异性和重复性:
1.灵敏度 ：多次重复结果表明 ，最小检出量为14.8pg/ml 。
2.特异性：与人IL-1α、IL-4、IL-6、小鼠IL-21等没有交叉反应。
3.重复性 ：板内 ，板间变异系数均<10%.
参考文献:
Ettinger, R., et al., J. Immunol., 2005, 175: 7867 - 7879. IL-21 Induces Differentiation of Human Naive and Memory B Cells into Antibody-Secreting Plasma Cells.
Ozaki, K., et al., J. Immunol., 2004; 173: 5361 - 5371. Regulation of B Cell Differentiation and Plasma Cell Generation by IL-21, a Novel Inducer of Blimp-1 and Bcl-6.
Zeng, R., et al., Blood, 2007; 109: 4135 - 4142. The molecular basis of IL-21–mediated proliferation. Zeng, R., et al., J. Exp. Med., Jan 2005; 201: 139 - 148. Synergy of IL-21 and IL-15 in regulating CD8+ T cell expansion and function.
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