产品说明(可下载)大鼠T细胞免疫球蛋白定量分析酶联免疫检测试剂盒
本试剂盒仅供科研使用 。用于体外定量检测大鼠血清 、血浆或细胞培养上清液中的KIM-1浓度 。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分是否完整,如有产品包装破损或质量投拆，请在收到货一个月之内联系尊龙凯时人生就是搏 。
大鼠KIM-1简介：
、T细胞 、 、和造细胞进行 。
检测原理:
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中KIM-1的浓度 。KIM-1捕获抗体已预包被于酶标板上 ，当加入标本或参考品时 ，其中的KIM-1会与捕获抗体结合 ，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。当加入生物素化的抗大鼠KIM-1抗体后 ，抗大鼠KIM-1抗体与KIM-1接合 ，形成夹心的免疫复合物，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素 。生物素与亲合素特异性结合 ，亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来；其它游离的成分通过洗涤的过程被除去 。最后加入显色剂 ，若样本中存在KIM-1将会形成免疫复合物 ，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色 。通过酶标仪检测，读其450nm处的OD值 ，KIM-1浓度与OD450值之间呈正比，通过参考品绘制标准曲线，对照未知样本中OD值 ，即可算出标本中KIM-1浓度 。
大鼠KIM-1定量分析酶联免疫检测试剂盒组成:
组分 | 规格（96T/48T） |
大鼠KIM-1预包被板 | 12条/6条 |
样本分析缓冲液 | 5ml/3ml |
标准品稀释液 | 10ml/5ml |
大鼠KIM-1标准品 | 2支/1支(冻干) |
大鼠KIM-1生物素化抗体 | 10ml/5ml |
亲和素连接的HRP酶 | 10ml/5ml |
浓缩洗涤液 20× | 30ml/15ml |
TMB底物 | 10ml/5ml |
中止液 | 5ml/3ml |
封板胶纸 | 3/2张 |
说明书 | 1份 |
标本收集:
1.标本的收集请按下列流程进行操作 ；
A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可；
B.血清标本应是自然凝固后，取上清，避免在冰箱中凝固血液；
C.血浆标本 ，推荐用EDTA的方法收集 ；
D.若待测样本不能及时检测 ，标本收集后请分装 ，冻存于－20℃ ，避免反复冻融 。
2.血清标本不应添加任何防腐剂或抗凝剂 ；
3.标本应清澈透明，检测前样本中如有悬浮物应通过离心去除。
4.请勿使用溶血 ，高血脂或污染的标本检测 ，否则结果将不准确。
注：大鼠血清或血浆样本请用样本分析缓冲液做倍比稀释后再检测。
注意事项:
1.试剂盒请保存在2～8℃ 。
2.浓缩洗涤液因在低温下可能有结晶 ，请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液 。
3.标准品复溶加样后 ，剩余部份请丢弃 。
4.底物请勿接触氧化剂和金属。
5.加样时，请及时更换枪头 ，避免交叉污染 。
6.严禁混用不同批号的试剂盒组份 。
7.充分混匀对保证反应结果的准性很重要，在加液后请轻轻叩击边缘以保证混匀。
8.室温反应 ，请严格控制在25-28℃ 。
9.洗涤过程是至关重要的，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
10.试验中标准品和样本检测时建议作双复孔。
11.加样过程中避免气泡的产生。
12.血清和血浆标本的检测时 ，检测抗体的孵育时间应适当延长
检测前准备工作:
1.试剂盒自冰箱中取出后应置室温（25-28℃）平衡20分钟 ；每次检测后剩余试剂请及时于2～8℃保存 。
2.将浓缩洗涤液用双蒸水或去离子水稀释(1份加19份水)。
3. 如有5×标准品稀释液用双蒸水或去离子水稀释(1份加4份水)。
4.标准品:按标签复溶体积用标准品稀释液复溶使KIM-1终浓度达到600pg/ml ，室温反应 ，请严格控制在25～28℃，静置15~20分钟后轻轻混悬（建议抽吸几次）待彻底溶解，用标准品稀释液倍比梯度稀释后依次加入检测孔中 。（标准曲线取七个点，最高浓度为600 pg/ml,标准品稀释液直接加入作为0浓度.）
洗涤方法:
自动洗板机或大鼠工洗板 ：每孔洗涤液为300ul，注入与吸出间隔15-30秒 。最后洗板完成后将板倒扣着在厚吸水纸上用力拍干 。
实验过程需自备的材料 ：
1.不同规格的加样枪及相应的枪头；
2.酶标仪；
3.自动洗板机；
4.去离子水或双蒸水 ；
操作步骤:
1.通过计算并确定一次性实验所需的板条数，取出所需板条放置在框架内，暂时用不到板条请放回铝箔袋密封 ，保存于4℃ 。
2.建议设置本底较正孔，即空白孔,设置方法为该孔只加TMB显色液和中止液。每次实验均需做标准品对照并画出标准曲线。
3.分别将标本或不同浓度标准品(100ul/孔)加入相应孔中 ，用封板胶纸封住反应孔，室温（25-28℃）孵育120分钟。对于血清或血浆标本，请加入50 ul样本分析缓冲液后加50 ul标本 ，如稀释量大 ，请将样本与样本分析缓冲液等量加入，不足部分用标准品稀释液补充至100ul 。
4.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干 。
5.加入生物素化抗体工作液(100ul/孔) 。用封板胶纸封住反应孔 ，室温（25-28℃）孵育60分钟 。
6.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。
7.加入亲和素链接的HRP酶工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔 ，避光室温（25-28℃）孵育20分钟。
8.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干 。
9.加入显色剂TMB100ul/孔，避光室温（25-28℃）孵育20分钟 。
10.加入中止液50ul/孔,混匀后即刻测量OD450值 。
结果判断:
1.复孔的值在20%的差异范围内结果才有效 ，复孔的值平均后可作为测量值。
2.每个标准品或标本的OD值应减去本底校正孔的OD值。
3.手工绘制标准曲线 。以标准品浓度作横坐标 ，OD值作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。
4.若标本OD值高于标准曲线上限 ，应适当稀释后重测 ，计算浓度时应乘以稀释倍数 。
典型数值和参考曲线
Pg/ml | 平均值 | 典型数值1 | 典型数值2 |
0 | 0.113 | 0.124 | 0.102 |
31.25 | 0.287 | 0.305 | 0.269 |
62.5 | 0.421 | 0.452 | 0.39 |
125 | 0.668 | 0.683 | 0.653 |
250 | 1.048 | 1.073 | 1.023 |
500 | 1.512 | 1.542 | 1.482 |
1000 | 2.363 | 2.453 | 2.273 |
大鼠KIM-1参考标准曲线.
注意 ：本图仅供参考 ，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算标本含量。
灵敏度 ，特异性和重复性:
1.灵敏度 ：多次重复结果表明，最小检出量为13.6pg/ml 。
2.特异性 ：与人TIM-1 、TIM-4和小鼠TIM-1 、TIM-4等均没有交叉反应。
3.重复性：板内，板间变异系数均<10%.
参考文献:
1. Mesri, M. et al. (2006) Int. Immunol. 18:473.
2. Baily, V. et al. (2002) J. Biol. Chem. 277:39739.
3. Mariat, C. et al. (2005) Phil. Trans. R. Soc. B 360:1681.
4. de Souza, A.J. et al. (2005) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102:17113.
5. Meyers, J.H. et al. (2005) Trends Mol. Med. 11:362.
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