大鼠白细胞介素1β定量分析酶联免疫检测试剂盒

本试剂盒仅供科研使用。用于体外定量检测大鼠血清

、血浆或细胞培养上清液中的IL-1β浓度。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分是否完整,如有产品包装破损或质量投拆

，请在收到货一个月之内联系尊龙凯时人生就是搏



。

IL-1β简介

：

白介素-1又称淋巴细胞激活因子,由 IL-1α和 IL-1β两种形式的多肽类细胞因子构成，与许多的细胞活性相关，包括增殖
、分化以及凋亡, 主要由血液中的单核细胞和巨噬细胞所产生, 各种上皮细胞,内皮细胞和间质细胞也能产生IL-1, 但血液中的IL-1 主要是由单核细胞和巨噬细胞所产生的IL-1β
。

由激活巨噬细胞产生的IL-1β，经蛋白酶-1酶解活化后

，成熟的白介素-1分子可以诱导白介素-2的释放、促进B细胞成熟与增殖
、诱导成纤维细胞生长因子活性，通过这些影响可以刺激胸腺细胞增殖

，进而影响机体的免疫反应
。研究表明白介素-1蛋白与炎症初始反应相关，起到调节因子的作用，通常被认为是内源性致热原

；细菌的内毒素或者一些非细菌的炎症因子都会诱导IL‐1产生







，然后被释放到局部组织
，IL-1β含量升高表明机体内有组织损伤或者感染产生, 如败血症等

。对IL-1β的研究主要集中在各种生理和病理免疫反应和炎症反应过程领域。

检测原理:

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中大鼠IL-1β的浓度。大鼠IL-1β捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时

，其中的大鼠IL-1β会与捕获抗体结合，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去

。当加入生物素化的抗大鼠IL-1β抗体后


，抗大鼠IL-1β抗体与大鼠IL-1β接合
，形成夹心的免疫复合物，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去


。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素


。生物素与亲合素特异性结合，亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来
；其它游离的成分通过洗涤的过程被除去


。最后加入显色剂

，若样本中存在IL-1β将会形成免疫复合物，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质
，在加入终止液后呈黄色
。通过酶标仪检测




，读其450nm处的OD值
，大鼠IL-1β浓度与OD450值之间呈正比







，通过参考品绘制标准曲线，对照未知样本中OD值，即可算出标本中IL-1β浓度

。

大鼠IL-1β定量分析酶联免疫检测试剂盒组成:

标本收集:

1.标本的收集请按下列流程进行操作
；

A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可
；

B.血清标本应是自然凝固后


，取上清
，避免在冰箱中凝固血液；

C.血浆标本，推荐用EDTA的方法收集；

D.若待测样本不能及时检测，标本收集后请分装，冻存于－20℃
，避免反复冻融
。

2.血清标本不应添加任何防腐剂或抗凝剂




；

3.标本应清澈透明，检测前样本中如有悬浮物应通过离心去除。

4.请勿使用溶血





，高血脂或污染的标本检测






，否则结果将不准确
。

注：大鼠血清或血浆样本请用样本分析缓冲液做倍比稀释后再检测

。

注意事项:

1.试剂盒请保存在2～8℃。

2.浓缩洗涤液因在低温下可能有结晶

，请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。

3.标准品复溶加样后
，剩余部份请丢弃。

4.底物请勿接触氧化剂和金属。

5.加样时，请及时更换枪头
，避免交叉污染

。

6.严禁混用不同批号的试剂盒组份
。

7.充分混匀对保证反应结果的准性很重要，在加液后请轻轻叩击边缘以保证混匀
。

8.室温反应
，请严格控制在25～28℃
。

9.洗涤过程是至关重要的


，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大

。

10.试验中标准品和样本检测时建议作双复孔


。

11.加样过程中避免气泡的产生。

12.血清和血浆标本的检测时


，检测抗体的孵育时间应适当延长
。

检测前准备工作:

1.试剂盒自冰箱中取出后应置室温（25～28℃）平衡20分钟


；每次检测后剩余试剂请及时于2～8℃保存

。

2.将浓缩洗涤液用双蒸水或去离子水稀释(1份加19份水)。

3.如有5X准品稀释液，请按所需量用双蒸水或去离子水稀释(1份加4水)。

4.标准品: 按标签复溶体积加入标准品稀释液复溶使大鼠IL-1β终浓度达到4000pg/ml


，室温反应，请严格控制在25～28℃
，静置10~15分钟后轻轻混悬（建议抽吸几次）待彻底溶解
，用标准品稀释液倍比梯度稀释后依次加入检测孔中



。（标准曲线取七个点

，最高浓度为4000pg/m l,标准品稀释液直接加入作为0浓度）

。

洗涤方法:

自动洗板机或人工洗板
：每孔洗涤液为300ul
，注入与吸出间隔15-30秒




。洗板5次
。最后一次洗板完成后将板倒扣着在厚吸水纸上用力拍干
。

实验过程需自备的材料：

1.不同规格的加样枪及相应的枪头

；   

2.酶标仪；

3.自动洗板机；                     

4.去离子水或双蒸水
；

操作步骤:

1.通过计算并确定一次性实验所需的板条数，取出所需板条放置在框架内


，暂时用不到板条请放回铝箔袋密封，保存于4℃


。

2.建议设置本底较正孔

，即空白孔设置方法为该孔只加TMB显色液和中止液

。每次实验均需做标准品对照并画出标准曲线

。

3.分别将标本或不同浓度标准品(100ul/孔)加入相应孔中








，用封板胶纸封住反应孔
，室温（25～28℃）孵育120分钟。对于血清或血浆标本
，请加入50ul样本分析缓冲液后加50ul标本，如稀释量大，请将样本与样本分析缓冲液等量加入，不足部分用标准品稀释液补充至100ul


。    

4.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干
。

5.加入生物素化抗体工作液(100ul/孔)
。用封板胶纸封住反应孔
，室温（25～28℃）孵育60分钟


。    

6.洗板5次
，且最后一次置厚吸水纸上拍干。

7.加入亲和素链接的HRP酶工作液(100ul/孔)
。用封板胶纸封住反应孔，避光室温（25～28℃）孵育20分钟
。

8.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干

。

9.加入显色剂TMB100ul/孔，避光室温（25～28℃）孵育20分钟。

10.加入终止液50ul/孔,混匀后即刻测量OD450值。

结果判断:

1.复孔的值在20%的差异范围内结果才有效，复孔的值平均后可作为测量值
。

2.每个标准品或标本的OD值应减去本底校正孔的OD值
。

3.手工绘制标准曲线
。以标准品浓度作横坐标



，OD值作纵坐标


，以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。

4.若标本OD值高于标准曲线上限

，应适当稀释后重测
，计算浓度时应乘以稀释倍数
。

典型数值和参考曲线

大鼠IL-1β参考标准曲线

注意
：本图仅供参考

，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算标本含量


。

灵敏度

，特异性和重复性:

1.灵敏度：多次重复结果表明，最小检出量为42.5pg/ml

。

2.特异性：与GDNF,GM-CSF,IFN-γ,IL-1 R6, PDGF-BB,TNF-α,VEGF等没有交叉反应
。

3.重复性


：板内

，板间变异系数均<10%.

参考文献:

1. Nickel, W. (2003) Eur. J. Biochem. 270:2109.

2. Beuscher, H.U. et al. (1988) J. Biol. Chem. 263:4023.

3. Pollock, A.S. et al. (2003) FASEB J. 17:203.

4. Dinarello, C.A. (1996) Blood 87:2095.

5. Leong, S.R. et al. (1988) Nucleic Acids Res. 16:9053.