货号

H030

种属

人

细胞来源

从ATCC/中科院/协和医院等地引进

生长特性

贴壁 上皮样 少量圆形悬浮

培养条件

培养基

：90%DMEM+10%FBS

温度：37℃     气相


：95%空气
，5%二氧化碳

传代

1.用75%酒精喷洒整个培养瓶消毒，将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲

，.然后置于无菌操作台，打开瓶口，将其中的培养液去掉
，再往其中加入5-6mL新鲜培养基(以T25培养瓶为例)并置于细胞培养箱中培养

，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代
，一般2到3天换一次液

；

2.待细胞长满瓶底面积80%-90%

，需要对其进行传代，传代比例为1:3到1:6

；

3传代步骤：将0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°预热，倒掉培养瓶中的培养基
，往培养瓶中加入3-5 ml PBS，轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1-2 ml预热好的胰酶

，置于37°孵育消化（第一次消化需时常取出置于显微镜下观察，以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为最佳消化时间，记录最佳消化时间，以便于下次消化）
，消化好后加入3ml完全培养基终止消化
。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞

，使之完全脱落，然后收集细胞悬液，1200rpm离心3min






，弃上清

，加入完全培养基重悬细胞
，进行传代。

保存

冻存条件
：80%完全培养基+10%FBS+10%DMSO

(备注


：建议使用本公司的冷冻液（H-W-100），用4度保存的冷冻液直接重悬细胞，不能预热后使用。)

保存条件
：液氮存储

供应限制

经供研究之用

常见问题及解决方案

1.培养瓶有破裂

，培养液有漏液



：细胞极大可能会污染，所以尊龙凯时人生就是搏会及时安排帮老师解决。

2.收到细胞后尽快更换为含 10%血清的新鲜培养基，如因特殊情况需要继续使用原瓶培养基


，请在原瓶培养基中额外添加 10%的血清（原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过 72 小时）

3.细胞漂浮

：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱




。1-2小时后观察
，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常



，剩余漂浮的细胞可以去掉


，留8-10ml培养液培养观察，细胞生长至汇合度80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养
，中间注意观察，尊龙凯时人生就是搏的技术人员会一直跟踪指导




，直到问题解决。