货号

H003

种属

人

细胞来源

从ATCC/中科院/协和医院等地引进

生长特性

贴壁 上皮样

培养条件

培养基：90%DMEM(H)+10%FBS+2mM L谷氨酰胺

温度：37℃     气相：95%空气

，5%二氧化碳

传代

1.用75%酒精喷洒整个培养瓶消毒，将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲
，.然后置于无菌操作台，打开瓶口，将其中的培养液去掉
，再往其中加入5-6mL新鲜培养基(以T25培养瓶为例)并置于细胞培养箱中培养，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代，一般2到3天换一次液

；

2.待细胞长满瓶底面积80%-90%

，需要对其进行传代，传代比例为1:3到1:8；

3传代步骤
：将0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°预热

，倒掉培养瓶中的培养基，往培养瓶中加入3-5 ml PBS，轻晃洗涤后弃去
。往瓶中加1-2 ml预热好的胰酶
，置于37°孵育消化（第一次消化需时常取出置于显微镜下观察，以显微镜下细胞触角回收变圆
、轻拍瓶壁见细胞脱落为最佳消化时间


，记录最佳消化时间

，以便于下次消化）
，消化好后加入3ml完全培养基终止消化


。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞
，使之完全脱落
，然后收集细胞悬液
，1200rpm离心3min
，弃上清

，加入完全培养基重悬细胞
，进行传代




。

保存

冻存条件：85%完全培养基+10%FBS+5%DMSO

(备注
：建议使用本公司的冷冻液（H-W-100）





，用4度保存的冷冻液直接重悬细胞




，不能预热后使用


。)

保存条件



：液氮存储

供应限制

经供研究之用

常见问题及解决方案

1.培养瓶有破裂，培养液有漏液
：细胞极大可能会污染


，所以尊龙凯时人生就是搏会及时安排帮老师解决。

2.收到细胞后尽快更换为含 10%血清的新鲜培养基

，如因特殊情况需要继续使用原瓶培养基
，请在原瓶培养基中额外添加 10%的血清（原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过 72 小时）

3.细胞漂浮：培养瓶不开封
，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。1-2小时后观察

，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常


，剩余漂浮的细胞可以去掉
，留8-10ml培养液培养观察，细胞生长至汇合度80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶
，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，尊龙凯时人生就是搏的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决


。