货号

H111

种属

人

细胞来源

ATCC/中科院/协和医院等地引进

生长特性

贴壁  上皮样

培养条件

培养基： MCDB131 + 10%FBS+10ng/mL EGF+1 µg/mL Hydrocortisone +10 mM Glutamine

 （推荐HAKATA优等胎牛血清

，货号:HN-FBS-50）

温度：37℃     气相：95%空气,5% CO2

传代

1. 用75%酒精喷洒整个培养瓶消毒，将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲
，.然后置于无菌操作台


，打开瓶口，将其中的培养液去掉，再往其中加入5-6mL新鲜培养基(以T25培养瓶为例)并置于细胞培养箱中培养
，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代
，一般2到3天换一次液





；

2.待细胞长至80-90%时，需要对其进行传代


，推荐传代比例为1:3至1:6 




；

3传代步骤
：将0.25%胰酶-0.53 mM EDA消化液置于37°预热




，倒掉培养瓶中的培养基


，往培养瓶中加入3-5 ml PBS，轻晃洗涤后弃去
。往瓶中加1-2 ml预热好的胰酶

，置于37°孵育消化（第一次消化需时常取出置于显微镜下观察，以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为最佳消化时间
，记录最佳消化时间，以便于下次消化）
，消化好后加入3ml完全培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞






，使之完全脱落



，然后收集细胞悬液

，1200rpm离心5min，弃上清

，加入完全培养基重悬细胞



，进行传代。

保存

冻存条件
：80%完全培养基+10%FBS+10%DMSO

(备注
：建议使用本公司的冷冻液（H-W-100），用4度保存的冷冻液直接重悬细胞
，不能预热后使用。)

保存条件



：液氮存储

供应限制

仅供研究之用

常见问题及解决方案

1.培养瓶有破裂


，培养液有漏液


：细胞极大可能会污染，所以尊龙凯时人生就是搏会及时安排帮老师解决。

2.收到细胞后尽快更换为含 10%血清的新鲜培养基.

3.细胞漂浮






：培养瓶不开封
，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。1-2小时后观察
，如细胞大部分又贴回瓶底

，表明细胞活力正常
，剩余漂浮的细胞可以去掉，留8-10ml培养液培养观察
，细胞生长至汇合度80%，进行消化传代




；如细胞还是不贴壁
，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，尊龙凯时人生就是搏的技术人员会一直跟踪指导



，直到问题解决。