货号

H056

种属

人

细胞来源

从ATCC/中科院/协和医院等地引进

生长特性

贴壁 上皮样

培养条件

培养基


：90%RPMI-1640+10%FBS

温度：37℃     气相

：95%空气
，5%二氧化碳

传代

1.用75%酒精喷洒整个培养瓶消毒
，将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲，.然后置于无菌操作台
，打开瓶口


，将其中的培养液去掉，再往其中加入5-6mL新鲜培养基(以T25培养瓶为例)并置于细胞培养箱中培养
，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代，一般2到3天换一次液；

2.待细胞长满瓶底面积80%-90%，需要对其进行传代
，传代比例为1:3到1:6；

3传代步骤
：将0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°预热，倒掉培养瓶中的培养基，往培养瓶中加入3-5 ml PBS
，轻晃洗涤后弃去
。往瓶中加1-2 ml预热好的胰酶
，置于37°孵育消化（第一次消化需时常取出置于显微镜下观察

，以显微镜下细胞触角回收变圆




、轻拍瓶壁见细胞脱落为最佳消化时间
，记录最佳消化时间




，以便于下次消化）



，消化好后加入3ml完全培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之完全脱落，然后收集细胞悬液，1200rpm离心3min
，弃上清
，加入完全培养基重悬细胞
，进行传代。

保存

冻存条件


：80%完全培养基+10%FBS+10%DMSO

(备注：建议使用本公司的冷冻液（H-W-100），用4度保存的冷冻液直接重悬细胞

，不能预热后使用
。)

保存条件：液氮存储

供应限制

经供研究之用

常见问题及解决方案

1.培养瓶有破裂
，培养液有漏液


：细胞极大可能会污染，所以尊龙凯时人生就是搏会及时安排帮老师解决
。

2.收到细胞后尽快更换为含 10%血清的新鲜培养基


，如因特殊情况需要继续使用原瓶培养基

，请在原瓶培养基中额外添加 10%的血清（原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过 72 小时）

3.细胞漂浮
：培养瓶不开封


，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱


。1-2小时后观察





，如细胞大部分又贴回瓶底
，表明细胞活力正常
，剩余漂浮的细胞可以去掉
，留8-10ml培养液培养观察

，细胞生长至汇合度80%

，进行消化传代




；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶
，原培养瓶加部分培养液继续培养


，中间注意观察
，尊龙凯时人生就是搏的技术人员会一直跟踪指导
，直到问题解决。