人白细胞介素18定量分析酶联免疫检测试剂盒
本试剂盒仅供科研使用。用于体外定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的IL-18浓度。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分是否完整。如有产品包装破损或质量投拆,请在收到货一个月之内联系尊龙凯时人生就是搏。
IL-18简介:
白介18(IL-18)是一个18 kDa的细胞因子,结构上与IL-1极其相似,对T细胞的活化有重要影响。IL-18的前体缺少信号肽,前体由IL-1beta转换酶(ICE)裂解为成熟的IL-18。
有报道称IL-18由下列细胞产生:树突状细胞、活化的巨噬细胞、凯夫勒细胞、角化细胞、肠内皮细胞、格根包尔氏细胞、肾上腺皮质细胞等。其中有报道称人的角化细胞是IL-18的主要产生源。
IL-18对T辅助细胞起作用,其效果是与IL-12协同强烈刺激T辅助细胞产生IFN-γ。当然,IL-18也有许多其它的效用,包括刺激外周血中由单核细胞产生IFN-γ 和 GM-CSF水平的升高,刺激T细胞产生Th1类的细胞因子如IL-2、IFN-γ 和GM-CSF等,提高Th1类的细胞表面的Fas配体的表达。此外,在治疗肿瘤、感染和自身免疫方面,IL-18也是一个重要的预后指标。
检测原理:
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中IL-18的浓度。IL-18捕获抗体已预包被于酶标板上,当同时加入标本或参考品和检测抗体时,其中IL-18蛋白上的不同位点会与捕获抗体和检测抗体结合,形成夹心复合物,锚定在固相载体板上,其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。生物素与亲合素特异性结合,亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来;其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。最后加入显色剂,若样本中存在IL-18将会形成免疫复合物,辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质,在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测,读其450nm处的OD值,IL-18浓度与OD450值之间呈正比,通过参考品绘制标准曲线,对照未知样本中OD值,即可算出标本中IL-18浓度。
人IL-18定量分析酶联免疫检测试剂盒组成:
组分 | 规格(96T/48T) |
人IL-18预包被板 | 12条/6条 |
样本分析缓冲液 | 5ml/3ml |
人IL-18标准品稀释液 | 10ml/5ml |
人IL-18标准品 | 4支/2支(冻干) |
生物素化抗体 | 5ml/2.5ml |
HRP酶稀释液 | 11ml/5.5ml |
5000×HRP连接的酶结合物 | 2.2μL/1.1μL |
浓缩洗涤液 | 30ml/15ml |
TMB底物 | 10ml/5 ml |
终止液 | 5ml/3 ml |
封板胶纸 | 3/2张 |
说明书 | 1份 |
标本收集:
1.标本的收集请按下列流程进行操作;
A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可;
B.血清标本应是自然凝固后,取上清,避免在冰箱中凝固血液;
C.血浆标本,推荐用EDTA的方法收集若待测样本不能及时检测,
D.标本收集后请分装,冻存于-20℃,避免反复冻融。
2.血清标本不应添加任何防腐剂或抗凝剂;
3.标本应清澈透明,检测前样本中如有悬浮物应通过离心去除。
4.请勿使用溶血,高血脂或污染的标本检测,否则结果将不准确。
注:人血清或血浆样本请用样本分析缓冲液做倍比稀释后再检测。
注意事项:
1.试剂盒请保存在2~8℃。
2.浓缩洗涤液因在低温下可能有结晶,请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
3.标准品复溶加样后,剩余部分请丢弃。
4.底物请勿接触氧化剂和金属。
5.加样时,请及时更换枪头,避免交叉污染。
6.严禁混用不同批号的试剂盒组份。
7.充分混匀对保证反应结果的准性很重要,在加液后请轻轻叩击边缘以保证混匀。
8.室温反应,请严格控制在25~28℃。
9.洗涤过程是至关重要的,洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。
10.试验中标准品和样本检测时建议作双复孔。
11.加样过程中避免气泡的产生。
12.血清和血浆标本的检测时,检测抗体的孵育时间应适当延长。
检测前准备工作:
1.试剂盒自冰箱中取出后应置室温(25~28℃)平衡20分钟;每次检测后剩余试剂请及时于2~8℃保存。
2.将浓缩洗涤液用双蒸水或去离子水稀释(1份加19份水)。
3.如有5X准品稀释液,请按所需量用双蒸水或去离子水稀释(1份加4水)。
4.标准品: 按标签复溶体积加入标准品稀释液复溶使IL-18终浓度达到5000pg/ml,室温反应,请严格控制在25~28℃,静置15~20分钟后轻轻混悬(建议抽吸几次)待彻底溶解,用标准品稀释液倍比梯度稀释后依次加入检测孔中。(标准曲线取七个点,最高浓度为5000 pg/ml,标准品稀释液直接加入作为0浓度.)
洗涤方法:
自动洗板机或人工洗板:每孔洗涤液为300ul,注入与吸出间隔15-30秒。洗板5次。最后一次洗板完成后将板倒扣着在厚吸水纸上用力拍干。
实验过程需自备的材料:
1.不同规格的加样枪及相应的枪头;
2.酶标仪;
3.自动洗板机;
4.去离子水或双蒸水;
操作步骤:
1.通过计算并确定一次性实验所需的板条数,取出所需板条放置在框架内,暂时用不到板条请放回铝箔袋密封,保存于4℃。
2.建议设置本底较正孔,即空白孔,设置方法为该孔只加TMB显色液和中止液。每次实验均需做标准品对照并画出标准曲线。
3.分别将标本或不同浓度标准品(100ul/孔)加入相应孔中,对于血清或血浆标本,请加入50 ul样本分析缓冲液后加50 ul标本, 如稀释量大,请将样本与样本分析缓冲液等量加入,不足部分用标准品稀释液补充至100ul。
4.加入生物素化抗体工作液(50ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔,室温(25~28℃)孵育120分钟。
5.洗板5次,且最后一次置厚吸水纸上拍干。
6.加入亲和素连接的HRP酶工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔,避光室温(25~28℃)孵育30分钟。
7.洗板5次,且最后一次置厚吸水纸上拍干。
8.加入显色剂TMB100ul/孔,避光室温(25~28℃)孵育20分钟。
9.加入终止液50ul/孔,混匀后即刻测量OD450值。
结果判断:
1.复孔的值在20%的差异范围内结果才有效,复孔的值平均后可作为测量值。
2.每个标准品或标本的OD值应减去本底校正孔的OD值。
3.手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标,OD值作纵坐标,以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。
4.若标本OD值高于标准曲线上限,应适当稀释后重测,计算浓度时应乘以稀释倍数。
典型数值和参考曲线
浓度pg/ml | 典型OD值1 | 典型OD值2 | OD平均值 |
0 | 0.1491 | 0.1151 | 0.1321 |
156.25 | 0.3517 | 0.2965 | 0.3241 |
312.5 | 0.4672 | 0.4502 | 0.4587 |
625 | 0.6943 | 0.6755 | 0.6849 |
1250 | 0.9816 | 0.9724 | 0.977 |
2500 | 1.4186 | 1.3492 | 1.3839 |
5000 | 2.0412 | 1.9262 | 1.9837 |
人IL-18参考标准曲线
注意:本图仅供参考,应以同次试验标准品所绘标准曲线计算标本含量。
灵敏度,特异性和重复性:
1.灵敏度:多次重复结果表明,最小检出量为35.8pg/ml。
2.特异性:与人IL-18 sR,IL-18 sR_/Fc Chimera,IL-18 sR,IL-18 sR,小鼠IL-18,大鼠IL-18等没有交叉反应。
3.重复性:板内,板间变异系数均<10%.
参考文献:
1) Alsaleh, G., et al., J. Immunol. 182, 5088-5097 (2009)
2) Tada, H., et al., Infect. Immunol. 73, 7967-7976 (2005)
3) Rouabhia, M., et al., Infect. Immunol. 75, 3739-3746 (2002)
4) Vujisic, S., et al., Hum. Reprod. 21, 2650-2655 (2006)
5) Narita, M., et al., Clin. Diagn. Lab. 7, 909-914 (2000)
6) P arikh, C. R., et al., J. Am. Soc. Nephrol. 16, 3046-3052 (2005)
7) Baratin, M. L., et al., PNAS. 102, 14747-14752 (2005)
8) Kaizu, M., et al., Virology 313, 8-12 (2003)
货号 | 产品名称 | 规格 | 价格 | 指令 |
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