产品说明(可下载)人白细胞介素9定量分析酶联免疫检测试剂盒
本试剂盒仅供科研使用。用于体外定量检测人血清 、血浆或细胞培养上清液中的IL-9浓度 。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分是否完整 。如有产品包装破损或质量投拆 ，请在收到货一个月之内联系尊龙凯时人生就是搏 。
IL-9简介 ：
白细胞介素9，又称为P40 ，T细胞生长因子P40 ，IL-9等，是属于具有独特的γ链受体的包括IL-2, IL-4, IL-7, IL-15 和 IL-21等一类细胞因子中的成员之一。成熟的IL-9有126个氨基酸残基的分子量为14KDa的糖蛋白 ，该分子中有10个半胱氨酸和它形成二硫键 。IL-9是由144个氨基酸的前体分子经过剪切掉18个分子的信号肽形成 。
IL-9由T细胞 ，特别是CD4+辅助的T细胞产生的，对造血系细胞具有多重效应的细胞因子 。IL-9能刺激细胞分化和延缓调亡。IL-9同时还是对Th2淋巴细胞 、B细胞，肥大细胞和嗜酸性粒细胞有多重的效果 。对由肺部吸入的过敏反应原的哮喘病患者，能引起IL-9迅速上调。
检测原理:
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中IL-9的浓度。IL-9捕获抗体已预包被于酶标板上 ，当加入标本或参考品时 ，其中的IL-9会与捕获抗体结合 ，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。当加入生物素化的抗人IL-9抗体后 ，抗人IL-9抗体与IL-9接合 ，形成夹心的免疫复合物 ，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去 。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素 。生物素与亲合素特异性结合 ，亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来；其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。最后加入显色剂 ，若样本中存在IL-9将会形成免疫复合物 ，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质 ，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测，读其450nm处的OD值 ，IL-9浓度与OD450值之间呈正比，通过参考品绘制标准曲线，对照未知样本中OD值，即可算出标本中IL-9浓度 。
人IL-9定量分析酶联免疫检测试剂盒组成:
组分 | 规格（96T/48T） |
人IL-9预包被板 | 12条/6条 |
样本分析缓冲液 | 5ml/3ml |
5×标准品稀释液 | 10ml/5ml |
人IL-9标准品 | 8支/4支(冻干) |
人IL-9生物素化抗体 | 10ml/5ml |
亲和素连接的HRP酶 | 10ml/5ml |
浓缩洗涤液 20× | 30ml/15ml |
TMB底物 | 10ml/5 ml |
中止液 | 5ml/3 ml |
封板胶纸 | 3/2张 |
说明书 | 1份 |
标本收集:
1.标本的收集请按下列流程进行操作；
A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可；
B.血清标本应是自然凝固后，取上清 ，避免在冰箱中凝固血液；
C.血浆标本 ，推荐用EDTA的方法收集若待测样本不能及时检测 ，
D.标本收集后请分装，冻存于－20℃ ，避免反复冻融 。
2.血清标本不应添加任何防腐剂或抗凝剂 ；
3.标本应清澈透明 ，检测前样本中如有悬浮物应通过离心去除 。
4.请勿使用溶血，高血脂或污染的标本检测 ，否则结果将不准确。
注：人血清或血浆样本请用标准品稀释液稀释后再检测。
注意事项:
1.试剂盒请保存在2～8℃。
2.浓缩洗涤液因在低温下可能有结晶 ，请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。
3.标准品复溶加样后，剩余部份请丢弃。
4.底物请勿接触氧化剂和金属 。
5.加样时，请及时更换枪头，避免交叉污染。
6.严禁混用不同批号的试剂盒组份 。
7.充分混匀对保证反应结果的准性很重要，在加液后请轻轻叩击边缘以保证混匀 。
8.室温反应 ，请严格控制在25～28℃。
9.洗涤过程是至关重要的，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大 。
10.试验中标准品和样本检测时建议作双复孔。
11.加样过程中避免气泡的产生 。
12.血清和血浆标本的检测时 ，检测抗体的孵育时间应适当延长 。
检测前准备工作:
1.试剂盒自冰箱中取出后应置室温（25～28℃）平衡20分钟 ；每次检测后剩余试剂请及时于2～8℃保存 。
2.将浓缩洗涤液用双蒸水或去离子水稀释(1份加19份水)。
3. 将5×标准品稀释液用双蒸水或去离子水稀释(1份加4份水)。
4.标准品: 按标签复溶体积加入1X标准品稀释液复溶使IL-9终浓度达到200pg/ml ，室温反应 ，请严格控制在25～28℃，静置15~20分钟后轻轻混悬（建议抽吸几次）待彻底溶解 ，用标准品稀释液倍比梯度稀释后依次加入检测孔中。（标准曲线取七个点，最高浓度为200 pg/ml,标准品稀释液直接加入作为0浓度.）
洗涤方法:
自动洗板机或人工洗板：每孔洗涤液为300ul ，注入与吸出间隔15-30秒 。洗板5次 。最后一次洗板完成后将板倒扣着在厚吸水纸上用力拍干 。
实验过程需自备的材料 ：
1.不同规格的加样枪及相应的枪头；
2.酶标仪 ；
3.自动洗板机；
4.去离子水或双蒸水 ；
操作步骤:
1.通过计算并确定一次性实验所需的板条数 ，取出所需板条放置在框架内 ，暂时用不到板条请放回铝箔袋密封 ，保存于4℃ 。
2.建议设置本底较正孔 ，即空白孔,设置方法为该孔只加TMB显色液和中止液 。每次实验均需做标准品对照并画出标准曲线 。
3.分别将标本或不同浓度标准品(100ul/孔)加入相应孔中 ，用封板胶纸封住反应孔，室温（25～28℃）孵育120分钟 。如果是血清血浆样本 ，不同样本稀释比例不一样，一般范围在2~15倍 ，如无明确范围 ，建议从5倍开始，加样稀释说明如下：每孔先加样本分析缓冲液50ul，再加用1×标准品稀释液稀释2.5倍后的样本，加样量为50ul。
4.洗板5次 ，且最后一次置厚吸水纸上拍干。
5.加入生物素化抗体工作液(100ul/孔) 。用封板胶纸封住反应孔 ，室温（25～28℃）孵育60分钟。
6.洗板5次 ，且最后一次置厚吸水纸上拍干。
7.加入亲和素连接的HRP酶工作液(100ul/孔) 。用封板胶纸封住反应孔，避光室温（25～28℃）孵育20分钟。
8.洗板5次 ，且最后一次置厚吸水纸上拍干 。
9.加入显色剂TMB100ul/孔 ，避光室温（25～28℃）孵育20分钟。
10.加入终止液50ul/孔,混匀后即刻测量OD450值 。
结果判断:
1.复孔的值在20%的差异范围内结果才有效 ，复孔的值平均后可作为测量值 。
2.每个标准品或标本的OD值应减去本底校正孔的OD值 。
3.手工绘制标准曲线 。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点 。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。
4.若标本OD值高于标准曲线上限 ，应适当稀释后重测 ，计算浓度时应乘以稀释倍数 。
典型数值和参考曲线
浓度pg/ml | 典型OD值1 | 典型OD值2 | OD平均值 |
0 | 0.1108 | 0.0936 | 0.1022 |
6.25 | 0.1463 | 0.1291 | 0.1377 |
12.5 | 0.3672 | 0.2392 | 0.3032 |
25 | 0.6808 | 0.5542 | 0.6175 |
50 | 1.0742 | 1.0228 | 1.0485 |
100 | 1.5934 | 1.5626 | 1.578 |
200 | 2.1751 | 2.0301 | 2.1026 |
人 IL-9参考标准曲线
注意 ：本图仅供参考，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算标本含量 。
灵敏度，特异性和重复性:
1.灵敏度 ：多次重复结果表明 ，最小检出量为2.2pg/ml 。
2.特异性 ：与人IL-2, IL-4,IL-7, IL-15 和 IL-21等没有交叉反应。
3.重复性：板内 ，板间变异系数均<10%.
参考文献:
1. Matsuzawa S,Sakashita k,kinoshita T,Ito S,Yamashita T,Koike K.IL-9 enhances the growth of huamn mast cell progenitors under stimulation with stem cell factor.J Immunol.2003 Apr 1;170(7);3461-7.
2. Sedgwick, J.D. and P.G. Holt (1983) J. Immunol. Methods 57:301.
3. Czerkinsky, C.C. et al. (1984) J. Immunol. Method 72:489.
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