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人白细胞介素10定量分析酶联免疫检测试剂盒 Human IL-10 ELISA KIT
货号:HH-08
价格   :¥2800.00/1760.00.00
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人白细胞介素10定量分析酶联免疫检测试剂盒

 

本试剂盒仅供科研使用。用于体外定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中的IL-10浓度 。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分是否完整 。如有产品包装破损或质量投拆,请在收到货一个月之内联系尊龙凯时人生就是搏 。

 

IL-10简介   :

人IL-10 是由160个氨基酸组成4个α螺旋结构的的细胞因子,分子量为18.5 kDa 。在水溶液中以二聚体形式存在  ,分子量约为39 kDa。

人IL-10是个多效性的因子   ,能够对多种细胞起作用      ,主要表现为免疫抑制和免疫刺激两方面的作用  ,特别是在调节淋巴系和髓系的细胞功能方面扮演重要的作用。IL-10 也具有单核细胞/巨噬细胞依赖 、抗原刺激引起的的PBMNC  NK 细胞合成其它细胞因子的抑制作用 。巨噬细胞膜介导的共刺激引起的T细胞和NK细胞活化后的产物及功能也可被IL-10所抑制。IL-10是单核细胞/巨噬细胞功能的强有力的调节物 。IL-10作为细胞介导的免疫反应的抑制物  ,能够抑制像前列腺素E2、TNF-α         、IL-1、IL-10 IL-8等许多引起炎症的细胞因子  。IL-10 能够促进可溶性TNF受体的释放和ICAM-1和B7在细胞表面的表达  。IL-10还参与B细胞  、柱状细胞及胸腺细胞的增殖和分化的调控 。人的IL-10与鼠类的IL-10在DNA序列和氨基酸序列上高度同源 ,其DNA序列中一个开放的基因框与艾伯斯坦-巴尔病毒基因组上基因框BCRF1高度同源   ,这可能在病毒感染中扮演重要角色的原因 。在许多与寄生虫感染的报道中  ,IL-10表达也会增加 ,如曼森氏血吸虫感染、利什曼原虫感染 、弓形虫感染  、锥虫感染等。分枝杆菌的感染如麻风分枝杆菌、结核杆菌   、 鸟分枝杆菌等的感染也会引起IL-10的表达升高 。

 

检测原理:

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中IL-10 的浓度。IL-10 捕获抗体已预包被于酶标板上,当加入标本或参考品时 ,其中的IL-10 会与捕获抗体结合  ,其它游离的成分通过洗涤的过程被除去 。当加入生物素化的抗人IL-10 抗体后 ,抗人IL-10 抗体与IL-10 接合  ,形成夹心的免疫复合物,其它游离的成分通过洗涤的过程被除去 。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。生物素与亲合素特异性结合 ,亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来;其它游离的成分通过洗涤的过程被除去 。最后加入显色剂 ,若样本中存在IL-10 将会形成免疫复合物  ,辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质,在加入终止液后呈黄色 。通过酶标仪检测 ,读其450nm处的OD值 ,IL-10 浓度与OD450值之间呈正比,通过参考品绘制标准曲线    ,对照未知样本中OD值 ,即可算出标本中IL-10 浓度。

 

人IL-10定量分析酶联免疫检测试剂盒组成:

组分

规格(96T/48T)

人IL-10预包被板

12条/6

样本分析缓冲液

5ml/3ml

标准品稀释液

10ml/5ml

人IL-10标准品

2支/1支(冻干)*

人IL-10生物素化抗体

10ml/5ml

亲和素连接的HRP酶

10ml/5ml

浓缩洗涤液 20×

30ml/15ml

TMB底物

10ml/5ml

中止液

5ml/3ml

封板胶纸

3/2

说明书

1

 

标本收集:

1.标本的收集请按下列流程进行操作;

A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可 ;

B.血清标本应是自然凝固后    ,取上清   ,避免在冰箱中凝固血液 ;

C.血浆标本,推荐用EDTA的方法收集 ;

D.若待测样本不能及时检测 ,标本收集后请分装  ,冻存于-20℃  ,避免反复冻融。

2.血清标本不应添加任何防腐剂或抗凝剂  ;

3.标本应清澈透明 ,检测前样本中如有悬浮物应通过离心去除  。

4.请勿使用溶血 ,高血脂或污染的标本检测 ,否则结果将不准确。

注:人血清或血浆样本请用样本分析缓冲液做倍比稀释后再检测       。

 

注意事项:

1.试剂盒请保存在28℃。

2.浓缩洗涤液因在低温下可能有结晶,请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。

3.标准品复溶加样后,剩余部份请丢弃    。

4.底物请勿接触氧化剂和金属  。

5.加样时  ,请及时更换枪头   ,避免交叉污染。

6.严禁混用不同批号的试剂盒组份 。

7.充分混匀对保证反应结果的准性很重要 ,在加液后请轻轻叩击边缘以保证混匀  。

8.室温反应,请严格控制在25~28℃。

9.洗涤过程是至关重要的,洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大 。

10.试验中标准品和样本检测时建议作双复孔     。

11.加样过程中避免气泡的产生  。

12.血清和血浆标本的检测时,检测抗体的孵育时间应适当延长   。

 

检测前准备工作: 

1.试剂盒自冰箱中取出后应置室温(25~28℃)平衡20分钟   ;每次检测后剩余试剂请及时于2~8℃保存。

2.将浓缩洗涤液用双蒸水或去离子水稀释(1份加19份水) 。

3.如有5x标准品稀释液,请按所需量用双蒸水或去离子水稀释(1份加4水)  。

4.标准品: 按标签复溶体积加入标准品稀释液复溶使IL-10终浓度达到2000pg/ml     ,室温反应 ,请严格控制在25~28℃  ,静置10~15分钟后轻轻混悬(建议抽吸几次)待彻底溶解      ,用标准品稀释液倍比梯度稀释后依次加入检测孔中 。(标准曲线取七个点 ,最高浓度为2000 pg/ml,标准品稀释液直接加入作为0浓度.)

图片3.png 

洗涤方法:

自动洗板机或人工洗板 :每孔洗涤液为300ul  ,注入与吸出间隔15-30秒 。洗板5次 。最后一次洗板完成后将板倒扣着在厚吸水纸上用力拍干  。

 

实验过程需自备的材料:

1.不同规格的加样枪及相应的枪头;   

2.酶标仪;

3.自动洗板机   ;                    

4.去离子水或双蒸水 ;

 

操作步骤:

1.通过计算并确定一次性实验所需的板条数 ,取出所需板条放置在框架内 ,暂时用不到板条请放回铝箔袋密封 ,保存于4℃  。

2.建议设置本底较正孔 ,即空白孔,设置方法为该孔只加TMB显色液和中止液。每次实验均需做标准品对照并画出标准曲线。

3.分别将标本或不同浓度标准品(100ul/孔)加入相应孔中   ,用封板胶纸封住反应孔 ,室温(25~28℃)孵育120分钟 。对于血清或血浆标本  ,请加入50 ul样本分析缓冲液后加50 ul标本   ,如稀释量大 ,请将样本与样本分析缓冲液等量加入  ,不足部分用标准品稀释液补充至100ul  。    4.洗板5次,且最后一次置厚吸水纸上拍干       。

5.加入生物素化抗体工作液(100ul/)。用封板胶纸封住反应孔,室温(25~28℃)孵育60分钟。   

6.洗板5次  ,且最后一次置厚吸水纸上拍干。

7.加入亲和素链接的HRP酶工作液(100ul/)。用封板胶纸封住反应孔 ,避光室温(25~28℃)孵育20分钟。

8.洗板5次  ,且最后一次置厚吸水纸上拍干  。

9.加入显色剂TMB100ul/孔,避光室温(25~28℃)孵育20分钟   。

10.加入终止液50ul/孔,混匀后即刻测量OD450值。

 

结果判断:

1.复孔的值在20%的差异范围内结果才有效   ,复孔的值平均后可作为测量值。

2.每个标准品或标本的OD值应减去本底校正孔的OD值 。

3.手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标  ,OD值作纵坐标   ,以平滑线连接各标准品的坐标点 。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度  。

4.若标本OD值高于标准曲线上限 ,应适当稀释后重测   ,计算浓度时应乘以稀释倍数。

典型数值和参考曲线

浓度pg/ml

典型OD1

典型OD2

OD平均值

0

0.11

0.1332

0.1216

62.5

0.2468

0.3662

0.3065

125

0.3104

0.4134

0.3619

250

0.4748

0.611

0.5429

500

0.9045

1.0647

0.9846

1000

1.4787

1.5241

1.5014

2000

2.0334

2.2461

2.13975

人IL-10参考标准曲线

图片1.png 

注意  :本图仅供参考 ,应以同次试验标准品所绘标准曲线计算标本含量  。

灵敏度 ,特异性和重复性:

1.灵敏度:多次重复结果表明 ,最小检出量为8.8pg/ml 。

2.特异性  :与人IL-10 sRα,IL-10 Rβ,IL-22,IL-24小鼠IL-10和猫IL-10等没有交叉反应。

3.重复性 :板内   ,板间变异系数均<10%.

参考文献:

J Surg Res. 2001 Aug;99(2):187-93.

Am J Gastroenterol. 2001 Jul;96(7):2098-102.

J Immunol. 2001 Aug 1;167(3):1535-41.

Immunol Invest. 2001 May;30(2):143-56.

 

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