最近 ，小编的细胞总是处于无休止的污染 ，污染，复苏和再污染的循环中 。
我相信有一个以上的童鞋有这样的麻烦，所以今天尊龙凯时人生就是搏将讨论细胞污染的问题。
首先 ，您需要知道什么是细胞污染 - 任何对细胞生长有害的成分或导致细胞不纯的异物都被视为污染 。根据污染源，细胞污染可分为化学污染 ，物理污染和生物污染 。
一是化学污染
用于细胞培养的培养基用高压蒸汽灭菌。其中 ，血清是细胞培养中常用的培养基 ，血清中存在潜在的化学污染 。此外，血清成分不确定 ，血清对不同细胞的生长有不同的影响，包括毒副作用。
二是物理污染
物理污染主要是指通过温度 ，振动 ，辐射和辐射等物理因素破坏细胞 。细胞培养基等暴露于辐射或紫外光引起细胞代谢的改变 。
恒温培养箱周围有设备产生机械振动 ，也可能对细胞生长有影响 。
三 ，微生物污染（这是尊龙凯时人生就是搏经常遇到的）
细菌 ：
常见的污染物之一，如大肠杆菌和葡萄球菌 ，是常见的细菌污染 。细菌污染很容易找到 。当培养的细胞被细菌污染时 ，培养液将变浑浊并且pH将改变 。还有少量的培养液通过肉眼观察而没有太大变化 ，细菌只能在显微镜下找到 。
如果您正在饲养自己的细胞 ，建议您每天查看它们 。
解：
1）无论什么污染 ，只要细胞被污染 ，如果不是非常珍贵的细胞 ，丢弃并重新培养。
在这里进行再培养时，要注意自己细胞的污染状况 。如果它在传递时被污染 ，则取决于受污染的光盘数量 。如果全部污染 ，那么所有的东西都被更换 ，先取出试剂 。原因是，等待您停止污染 ，您可以尝试使用原始试剂。
如果更换试剂或污染 ，则需要清洁培养箱和房间;如果是污染之一 ，可能是你自己操作的原因 ，下次需要多加注意 ，
通常 ，尊龙凯时人生就是搏只需要在需要使用它们时提高细胞 。它很少用于练习尊龙凯时人生就是搏的手。因此 ，污染的第一时刻是确保下一个细胞不会污染，然后细胞被提升并慢慢找到原因。
2）如果细胞非常稀少 ，需要保存珍贵细胞 ，建议配置含有10倍双抗体PBS和5倍双抗体的完整培养基 。然后用10倍双抗体PBS洗涤细胞5-10次。
然后 ，细胞用5倍双抗体完全培养洗涤3次以上，培养后每1小时更换一次 ，最后培养过夜2倍双抗体培养基 ，替换为双抗生素完全培养基 。第二天 。培养 ，传代两次以上，如果没有发现污染，可将其冷冻，并使一些细胞在没有抗生素的培养基中继续培养超过48小时 ，最后确定细胞不含污染物。
菌 ：
其中一种常见的污染物是曲霉菌，白色念珠菌 ，酵母，黑霉病 ，孢子 ，并且在雨季更容易受到污染。现在尊龙凯时人生就是搏正处于雨季 ，真菌也来了 。
真菌生长相对缓慢，并且在疾病开始时对细胞生长没有太大影响 。首先，如果只是观察细胞 ，可能会被忽略 ，但经过很长一段时间后，细胞的活力会变差。培养基是透明的，不会改变颜色 。其中可以看到白色或浅黄色的浮动物体。在显微镜下还有丝状 ，管状 ，树枝状或椭圆形物质 。念珠菌和酵母菌株呈椭圆形。当你看到明显的菌丝时 。
解：
1）因为霉菌有孢子 ，所以酒精 ，清洁和熄灭，紫外线等不可能去除霉菌！上面的第一个，不重要 ，立即处理。或与其他细胞分离，更换所用的实验室设备和试剂。
2）最好防止真菌 ，用硫酸铜溶液擦拭CO2培养箱，并在水盘中加入饱和量的硫酸铜 。
3）将饱和消毒的磷酸氢二钠高盐液加入培养箱的托盘中 ，以防止霉菌污染 。
4）应定期（1月左右）清洁孵化器 ，特别是在雨季 。
5）为防止霉菌污染 ，在培养基或放线菌素D或双抗体中加入3ul / ml两性霉素或制霉菌素 。
6）最重要的是培养良好的无菌概念 ，避免将培养基洒入培养箱和生物安全柜 。这些培养基洒在培养箱中，为细菌和真菌的繁殖提供了良好的条件 。
7）如果被污染，将所有细胞从受污染的CO2培养箱中转移出来并用过氧乙酸（所有 ，特别是四个角落）清洗培养箱。将过乙酸置于培养箱中1小时以使蒸汽充满。在过乙酸的气味消散后 ，将其转移到细胞中 。
8）彻底消毒环境 。整个培养室用福尔马林和高锰酸钾熏蒸 。用苯酚洗涤培养箱内部 ，包括托盘 ，密封2天 。
9）一旦细胞被污染 ，就很难保存 。即使使用制霉菌素或放线菌素D ，它也是一种伤害敌人10,000的方法 。高浓度的抗真菌剂对细胞有毒。
如果发现新的污染 ，pbs洗几次细胞 ，尽可能洗涤细菌 ，然后用两性霉素25ug / ml处理12-24小时 ，改变溶液后改变两性霉素3-5ug / ml ，改变每天连续液体 ，连续处理2-3天后 ，继代培养后 ，稍微接种到35mm培养皿中 ，不含两性霉素 ，观察霉菌是否继续生长 ，剩余的传代细胞继续加入两性霉素直至不是细胞添加没有霉菌生存 。 。
黑胶虫 ：
它可以穿透过滤膜或通过空气传播 。在低倍率下是黑点。黑虫可以在高放大倍数下游泳和游泳。一般来说 ，它不会影响太多 。仍然可以使用细胞 。的。通常 ，细胞生长状态良好 ，观察到的移动物体没有显着增加 ，并且培养基的颜色和透明度没有显着改变 ，并且在同一批血清培养细胞中可以发现类似的现象 。它对细胞生长状态没有显着影响 ，并且在细胞增殖旺盛后自然消失 ，除了更换血清外不需要特殊处理。
可能的污染原因 ：可能有许多原因，如液体消毒，操作问题 ，环境问题等 。
定期预防污染：
1 ，在培养基中加入双抗体，预防量可以 ，10ul / ml。然而，双抗体会影响细胞的状态 ，因此有必要在转染前去除双抗体并检测细胞的某些指标 ，以避免影响实验结果 。
2 ，培养箱应定期或紫外线消毒 ，培养箱应用酒精和解结器进行检测。培养箱中的水优选为三蒸水 。
3 ，超净平台物料提取设备培养液瓶操作必须按规定操作，不要随意操作 ，快速，频繁地四处走动。
4，超洁净平台的风扇不能太大，风扇要6-8格 。否则也可能导致霉菌污染
5.无菌室用甲醛熏蒸后 ，可用相同量的氨水中和，可在约数小时内操作 。
6 ，操作人员个人原因：这是最可预防的，在使用设备之前必须检查解决方案是否可用 ，是否过时 ，如果您是过时的，请不要冒险，请务必重新消毒或定期治疗 ，特别是有时没有面罩 ，手套 ，并且在操作时大声说话是最不合适的 。
最后，小编想说：
细胞污染 ，预防是硬道理 ！ ！ ！不要考虑补救措施 ，失去两者并不是一个好主意，最重要的是预防！预防 ！预防！ ！ ！
上海尊龙凯时人生就是搏生物科技有限公司
