细胞的复苏与冻存
细胞复苏：指将冻存的细胞解冻之后重新培养，细胞恢复生长的过程
。复苏过程如下图所示
：

常见问题解答：Q
：为什么细胞复苏后，很多难以贴壁?
A


：忽略培养基的问题，主要考虑细胞冻存时状态差或者复苏时动作太慢导致细胞死亡


。切记最重要的融化速度要快

，可不时摇动冷冻管，使之尽快通过最易受损的温度段(-5～0℃)
。Q：为什么细胞贴壁了




，却长不起来?
A



：此时需要考虑的是细胞密度问题，一些细胞倾向于维持一定的密度
，若复苏的细胞生长缓慢


，可将细胞转移到较小的培养瓶/皿中培养
。

细胞冻存
：将细胞放在低温环境(-70℃~-196℃)，细胞内的代谢降低

，可最大限度的保存细胞活力

，以便长期储存
。

常见问题解答：
Q：目前细胞冻存液多采用的什么配方?

A
：目前细胞冻存液的配方有很多种


，如培养基

：血清


：DMSO=7:2:1或8

：1



：1或5：4：1


，或直接用血清：DMSO=9:1。 这里推荐使用HAKATA无血清细胞冻存液
，无需程序降温
，细胞存活率和活力高达90%-98%


，适用于干细胞冻存及无血清培养细胞

。

Q
：若没有细胞冻存盒，尊龙凯时人生就是搏该怎么办?

A
：可先将冻存管放入4℃冰箱中10min
，再移至-20℃冰箱30min



，-80℃冰箱2h或过夜

，最后放入液氮罐内
。为了节约时间，还可直接在冻存盒外包裹一团棉花，用棉花代替冻存盒缓慢降温的特点，将细胞转移至-80℃冰箱过夜


，再转移至液氮保存
。

Q
：细胞冻存时对细胞量有要求吗?

A：细胞复苏时会有一定的细胞死亡
，因此细胞的浓度应足够高


，起始浓度106—107个/ml/管;