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      胎牛血清的这些指标你都知道吗?

      牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基,含有丰富的细胞生长必须的营养成份 ,常用于动物细胞的体外培养,具有极为重要的功能 。
      1.提供对维持细胞指数生长的激素,基础培养基中没有或量很少的营养物,以及主要的低分子营养物。
      2. 提供结合蛋白,能识别维生素、脂类、金属和其他激素等,能结合或调变它们所结合的物质活力。
      3.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合,起到解毒作用 。
      4.是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源 。
      5.起酸碱度缓冲液作用。
      6.提供蛋白酶抑制剂,使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活,保护细胞不受伤害。


      胎牛血清都有哪些重要的指标


      一、内毒素
      内毒素是革兰氏阴性菌的细胞壁外壁层上的特有成分。当细菌死亡自溶或粘附在其它细胞时,才表现其毒性 。内毒素直接参与细胞凋亡,血清中内毒素含量越低,对细胞毒性越小,越利于细胞的生长和传代;内毒素含量过高,会直接导致细胞提前老化 。国际上规定 ,胎牛血清的级别 ,应以内毒素水平的高低来确定,其中,特级胎牛血清的内毒素应<10EU/ml

      二、血红蛋白含量
      胎牛血清的颜色会根据血红蛋白含量的不同表现出黄色、淡黄色、橘红色 、微红色等。细胞培养用血清的标准是血红蛋白含量不高于20mg/dl,颜色越红,数值越高 ;反之 ,数值越低。实际上 ,血红蛋白含量的高低对血清并无直接影响 。这个指标的意义在于能体现出采血过程的严谨规范程度,良好的操作能降低血清的溶血。

      三、总蛋白含量
      胎牛血清的总蛋白含量一般范围是30-40mg/ml,数值偏高,说明采血的牛龄偏大 ,不是胎牛;数值偏低,表明血清可能掺水了 。

      四 、pH值
      根据药典,胎牛血清的pH值在7.0-8.0之间,并没有什么具体依据把进口血清和国产血清用7.5这个分界线界定。

      五、渗透压
      胎牛血清渗透压的检测一般采用冰点法,渗透压摩尔浓度(mOsmol/kg):280-360之间

      六 、微生物
      包括细菌、霉菌、支原体 、噬菌体等 。随着各个品牌血清生产条件的改善提高,细菌、霉菌等“大型”微生物几乎能100%控制 。支原体通过0.1um3次无菌过滤去除。如CellMax胎牛血清,3次0.1um无菌过滤以后 ,又通过培养法和DNA染色法进行支原体检测,结果均呈现阴性才会放行销售。关于噬菌体主要是生产环境过程中带入,又无法过滤,很难彻底清除,但对血清质量影响不大,不过对于工业生产的客户来说,往往会采用γ照射的胎牛血清来避免噬菌体。

      七、免疫球蛋白
      免疫球蛋白的数值能完全体现出采血时的牛龄情况 ,新生牛血清容易产生IgM,IgG的含量也偏高 ;胎牛血清不含IgM,IgG的含量也较低 。可以通过血清蛋白电泳SDS检测 。
      低IgG的胎牛血清推荐适用于抗体生产及相关领域。

      有下列情况者,对血清内毒素应格外留意筛选:
      1.养干细胞时 ,干细胞对内毒素非常敏感,如果血清中内毒素≥3EU/ml时,干细胞很容易死亡。很多使用者,在血清在试用前,就通过提早审核该批次《检测报告》,以决定是否入围进行试用 。
      2.养免疫细胞时,过高的内毒素可诱导免疫细胞释放炎症因子,抑制小鼠红细胞集落的形成等 。
      3.基因敲除相关的细胞实验 ,培养的细胞要尽可能保持其原始状态 ,任何引导细胞衰老或凋亡的试剂,都会让后续的实验结果“失之毫厘,谬以千里”。在准备血清和其他试剂时  ,选择极低的内毒素(最好≤1EU/ml),对实验至关重要 ;
      4.原代培养 、杂交瘤融合、细胞转染,或者肝细胞、神经细胞、内皮等难养细胞的扩增,这些都需要挑选好的血清给细胞以有力支持。因此 ,挑选更低的内毒素,是保证实验顺利的第一步。
      5.实验室有些细胞 ,需要长期培养 、长期冻存,或者经常复苏、经常培养的,血清会经常或长时间作用于细胞。为保证细胞的健康,都应该选用更低内毒素的血清,以避免内毒素长久对细胞的毒性影响 。
      总之,血清中内毒素含量过高,更容易导致细胞“亚健康”,造成数据不准 ,或细胞状态不良 、老化、甚至死亡 ,导致试验中断失败。血清中的内毒素越低越好。
      全球细胞培养学会均依据内毒素对血清的品质进行分级和命名。
      内毒素含量越低的血清,级别就越高 ,以胎牛血清为例 :
      当血清中内毒素含量≤10EU/ml时,此血清为特级胎牛血清;
      当血清中内毒素含量﹥10EU/ml,≤ 25EU/ml时,此血清为优级胎牛血清 ;
      当血清中内毒素含量≥ 25EU/ml时,此血清为标准级胎牛血清;


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