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      细胞培养小常识

      1.切记,细胞培养基的储存条件是2-8℃。如果细胞培养基不小心被冻,您应该融化培养基并观察是否有沉淀产生 。如果没有沉淀产生,培养基可以正常使用,如果出现沉淀,只能丢弃这些培养基。

      2.贮存在冰箱中的瓶口已开的培养基 ,可能在放置几天后颜色变紫。这主要是由于在暴露到周围的CO2水平时,碳酸氢钠导致了pH值的上升 。您可以在使用前松开瓶口,在CO2培养箱孵育培养基10-15min,来校正溶液的pH值(确定松开瓶口以保证气体交换)。

      3.当在无血清培养基中添加抗生素时,降低至少在有血清培养基中所使用浓度的50%。血清蛋白会结合和灭活一些抗生素 。在无血清培养条件下 ,抗生素不被灭活 ,可能对于细胞达到毒性水平。

      4.一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时 ,您应该在两到三周内使用它 。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。

      5.总之 ,大部分添加物和试剂最多可以冻融3次 ,如果次数更多都会在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉淀,将会影响它的性能。

      6.血清的热灭活在免疫分析时可以灭活补体系统。在免疫学研究,培养ES细胞,昆虫细胞和平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清。热灭活是以往公认的操作步骤,并没有确凿的证据说明这样做是有益的。相反 ,对大部分细胞而言 ,GIBCO和HyClone都不推荐热灭活血清。因为加热可能使血清中的沉淀增加 ,使您误以为污染。

      7.在进行传代培养时,尊龙凯时人生就是搏强烈推荐进行台盼兰活性记数。研究者常常通过一个简单的稀释(1∶4或1∶2)进行传代 ,不进行活性检测,您可能接种比你认为的低得多的浓度的细胞,这常常可能导致生长缓慢或培养物根本不生长 。

       

      8.在订购的细胞到达后 ,应立即复苏,如果培养基还没有准备好,可将其放入液氮中,尽快复苏 。千万不能放置在-20或-80℃的冰箱内 。

       

      9.细胞复苏往往是比较容易出问题的步骤。请在订购细胞时就向供应商索取详细的复苏步骤 ,并仔细阅读。有些供应商就不推荐在复苏时离心,对此类细节 ,应特别留意。

       

      如何避免血清中沉淀物的产生?

       

      1. 解冻血清时,请按照所建议的逐步解冻法(-20℃至4℃至室温),若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃),实验显示非常容易产生沉淀物。并随时将之摇晃均匀 ,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。

       

      2. 请勿将血清置于37℃太久 。若在37℃放置太久,血清会变得混浊,同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害,而影响血清的质量 。

       

      3.血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多 ,若非必要 ,可以无须做此步骤。

       

      4.若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30min的原则 ,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多 。


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