血清是细胞培养中唯一外源添加的成分不确定的物质
，血清的质量对实验成败起着关键性作用，但血清使用不当也可能会导致血清质量下降，造成细胞培养效果不理想



。今天来给大家聊聊血清使用中的一些疑惑，帮助大家理清头绪


，实验开展顺顺利利。

怎样确定血清使用浓度
？

这个只能通过测试了


。原则上血清添加量不要太多，通常分为5%


、10%



、20%几档
。部分细胞原代提取时会使用20%血清

，大部分细胞正常培养时会使用5%～10%的血清浓度


。至于某一株细胞适应什么样的血清浓度，还需要根据细胞特性



、实验目的做测试和调校


。

血清使用前需要离心吗
？

这个问题我理解为两种可能




。

其一

，因为血清融解后有“絮状物”析出

。如果没有出现其他异常情况



，或者血清只是用于细胞培养


，那么完全没有必要离心去除



。尊龙凯时人生就是搏知道血清析出的“絮状物”主要是血纤蛋白，其在血清中含量很高



，而且高度不溶，在血清冻融过程中极易析出，但它也是完全无害的，甚至能促进细胞生长
。另外


，它还增强了血清黏性
，为细胞提供了额外的机械缓冲。在其析出过程中




，会粘附培养体系中其他成分，离心去除


，反而会损失营养成分。

其二，实验要求纯净的培养体系

。培养的细胞需要进一步鉴定
，如免疫荧光、流式

、共聚焦拍照等，细胞表面如果有黏性较强的血纤蛋白
，势必会影响效果



。那么，建议400g离心5min即可
。如果需要进行精密实验
，如分离外泌体等

，那么就需要至少100000g离心1.5h以上

血清灭活和不灭活有什么不一样

？

在回答这个问题之前
，尊龙凯时人生就是搏先要弄清楚灭活究竟灭的是什么成分的活性。其实56℃、30min的处理只能去除补体和部分其他蛋白的活性。补体是免疫系统的一部分，在体内可通过多条途径被激活

，从而发挥调理吞噬
、裂解细胞
、介导炎症
、免疫调节和清除免疫复合物等多种作用
。血清灭活的说法最早是在细胞培养技术发展初期
，大部分实验室还在使用小牛血清甚至成体动物血清，或者以前培养某些人源细胞时会添加人血清
。因为血清供体已与环境长期接触
，体内免疫系统已经经历了一场又一场的战斗，而保留了“丰厚的战利品”——抗体、补体等


，这些成分在体内可以由免疫系统清除



，但在体外的细胞培养中，可能会对部分细胞产生损伤。巧在人们发现这些成分不耐受高温






，所以才有了热灭活处理
。

细胞培养技术发展到今天，尊龙凯时人生就是搏已经能把控原材料的质量。对于血清，尊龙凯时人生就是搏会选择胎牛来源
。因为在体内有胎盘屏障的隔离
，又尚未接触体外环境，其自身免疫系统


、免疫物质几乎为零

。这个时候
，如果不是对血清成分的极度苛刻，再谈灭活就有些多余了。甚至因为热处理
，导致血清内大量蛋白析出，同时粘附其他成分一起丢失，对细胞培养而言就得不偿失了

。

怎样为您的细胞选择合适的血清？

目前市面上的血清产品五花八门


，各种品牌宣称来自各个血源地








，让人眼花缭乱
。可以确定的是
，除了所谓的“水货”，它们当中绝大多数都是质量合格的产品

。但合格不一定好用
，或者说适用于某一种细胞。要确定一款血清的性能

，或者从众多血清来源中挑选一款

，唯一的办法就是筛选验证


。

血清的筛选验证主要包括

：形态验证




、增殖能力测试和克隆形成能力测试

。尊龙凯时人生就是搏通过多次传代

，分辨同细胞

、同代次
、不同血清样品培养的细胞形态间的细微差异

；或者同血清样品

、不同细胞

、不同代次间
，细胞形态维持的情况
。尊龙凯时人生就是搏通过同一细胞多次传代




，每代接种相同细胞量，间隔相同时间后计数得到单位时间倍增数，确定增殖性能

。又通过不同细胞在相同培养面积内接种相同的少量的细胞，根据形成的单克隆数量

、大小，判断血清支持克隆形成的能力。

一款血清需要综合达到这几个性能的高水平表现


，才能称为好血清

。或者一款血清在培养某种细胞时

，这几个方面的表现都优秀，才是最适用的。