制备

细胞要在液氮中冷冻
，所以要确保你的罐中充满氮气并且你有空间
。细胞应该是健康的（> 90％生存力）并且在对数期生长
。您还需要无菌1 mL低温小瓶; 它们有螺旋盖和橡胶密封，以防止氮气流出
。

冻存 

1. 在血细胞计数器中计数细胞。在离心机中在“2”上离心10mL细胞10分钟
   ，并重悬于细胞冻存液
   
   
   ，冻存液一般为
   ：

   1.培养基：血清
   
   
   ：DMSO=7：2
   
   ：1
   2.血清
   ：DMSO=9
   ：1
   普通细胞系可以用第一种配方冻存
   
   ，比较娇贵的细胞系用第二种配方冻存，如果实验室条件允许的话，可以都用第二种方法

2. 有些细胞不适合用通用冻存方式
   
   
   ，详细请参考  细胞冻存液配方，或者在尊龙凯时人生就是搏官网直接搜索细胞
   ，下方会有详细培养注意事项。

   浓度为2×10e6细胞/0.5mL冷冻培养基
   。在低温小瓶中等分0.5 mL /小瓶
   。

3. 将小瓶直立放入发泡胶盒中并盖好
   。置于-70°C下24小时
   
   
   
   。

4. 将小瓶放入棒中并放入液氮容器中。

复苏

制备

1. 温水浴至37°C
   。

2. 将10 mL培养基（RPMI，DMEM）置于无菌的15 mL离心管中
   。将2 mL FBS层缓慢地涂在管底部
   
   
   ，这样就可以看到两层。

3. 为您的新文化打造成长媒介
   。对于单克隆抗体
   ，这将是含有20％FBS和青霉素 - 链霉素的DMEM
   
   
   
   
   
   。

解冻

1. 将细胞从氮气储存中取出，并在37°C水浴中旋转快速解冻。

2. 用70％乙醇对小瓶外部进行消毒
   ，带入培养罩并缓慢加入到您准备的分层培养基的顶部
   
   。细胞应落到培养基和FBS之间的界面
   。

3. 在“3”上离心10分钟
   
   。在临床离心机中。

4. 吸取上清液并重新悬浮在您之前制备的生长培养基中
   。吸取到的CO一个T25和地点2 孵化器为您的新的文化发展。