细胞冻存之后复苏挂掉,小秋认为有几种可能的解释:
(1)细胞因未妥善储存而死亡(液氮容器存在问题,细胞冻存液存在问题等)。
(2)介质中缺少一些添加剂。例如,您是否添加了双倍量的胎牛血清?您的细胞是否需要任何不常用的特殊添加剂?
(3)为了复活,细胞的密度太低。为避免这种情况,请使用较小的烧瓶/平板。
如果你能提供一些你想要复活的细胞类型的细节,那将是很有用的。我的答案是指常见的哺乳动物细胞培养物,但如果你正在研究细菌,昆虫细胞等,还有其他可能的解释。
除上述要点外:
你可能过快地将细胞冻存 - 直接在液氮中(极不可能,但可能)。理想情况下,你应该将它们在含有异丙醇的冷冻箱中在-80℃下冷冻过夜,然后转移到液氮中。
或者你把它们解冻太慢。与流行的看法相反,你必须在室温下解冻细胞保存细胞1分钟,然后在水浴中孵育,直到你看到冷冻介质变成液体。不要在冰上融化。
此外,当冷冻保存时,重要的是细胞具有高活力,并且处于指数生长期,而不是处于平台期。
还有更多的可能,是你没有使用HAKATA无血清细胞冻存液!
这是一款无血清即用型细胞冻存液,最大的特点就是无需程序降温盒及稀释,无需分步降温,直接使用!
可在 - 80℃长期保存干细胞、肿瘤细胞和常规细胞。冷冻细胞时,用HAKATA细胞冻存液悬浮处于对数生长期的细胞,不需预冷,直接- 80℃冷冻保存,也可用液氮快速冷冻细胞;
复苏时用恒温箱或者水浴锅快速复苏细胞即可。不仅操作方便,更能提供稳定的冻存效果,获得更好的细胞活力。