MCF-7培养方案：

使用Eagle's MEM


，补充10％FBS
，1％青霉素/链霉素。还可以添加非必需氨基酸（0.1 mM）


，胰岛素（10ug / mL）和丙酮酸钠（1mM）。向培养基中加入10nM雌激素，使细胞数增加3-4倍


。在潮湿


，浓缩的CO2（5％）气氛中保持37°C的温度
。

一旦MCF-7细胞在平板上达到约90％汇合

，通过用1xPBS冲洗两次来除去培养基和传代细胞

。

向细胞中加入2-3mL温热（37℃）0.25％胰蛋白酶-0.53mM EDTA溶液以分散细胞层



。在倒置显微镜下观察
。分散应该在5到15分钟之间发生
。如果细胞没有正确分离


，将烧瓶放回37°C孵育室







。不要孵育超过3分钟左右

。注意：在分散过程中

，不要通过敲击或摇动烧瓶来搅拌冷藏









。当细胞脱落时

，这可能导致结块。

一旦MCF-7细胞层分散（在37℃下3分钟）
，通过在无菌管中向10mL完全生长培养基（参见步骤1）中加入5ml细胞/胰蛋白酶-EDTA使胰蛋白酶失活
。轻轻吹打吸出细胞

将细胞在125xg力下在生长培养基中离心5分钟。

从管中取出胰蛋白酶/生长培养基悬浮液
。

将沉淀（MCF-7细胞）重悬于10 mL新鲜生长培养基中（参见步骤1）

将1mL悬浮液加入到含有9mL原始生长培养基的每个新平板中（参见步骤1），并在37℃下在潮湿的5％CO 2气氛中孵育。

建议采用1：3或1
：6的传代培养比例

如上所述，尊龙凯时人生就是搏使用DMEM，但含有5％FBS（且不含抗生素或胰岛素）


。说实话
，任何生长培养基都适用于这些细胞。至于抗生素和胰岛素 - 它们是不必要的。由于历史原因

，胰岛素已被包括在许多乳腺培养物中。如果您使用胰岛素与无胰岛素进行“并排”比较
，您将看到没有差异（正如尊龙凯时人生就是搏所做的那样）。此外


，关于胰蛋白酶消化


，尊龙凯时人生就是搏常规使用0.05％胰蛋白酶-EDTA并在T75中加入2mL 2-3分钟

，然后用全培养基中和
。这一直对尊龙凯时人生就是搏有利



。

MCF-7细胞直达
。