收到冻存细胞后如何处理



？
1、首先，收到细胞时，请检查泡沫箱内干冰是否剩余
、细胞冻存管是否有解冻情况



，若出现细胞解冻情况，请拍照，并及时与技术支持联系（所拍照片将作为售后服务依据）；若细胞冻存管正常
，细胞株请尽速开始培养或立即冻存保存（置于-80℃冰箱，隔夜放置后
，移至液氮罐中保存）
，需要时
，复苏培养即可
。
2、准备好37℃水浴锅，并准备好细胞完全培养基（温育至37℃）；
3、在15ml离心管中加入9ml细胞完全培养基（温育至37℃）
；
4
、将装有冻存细胞的冻存管从液氮罐中取出
，立即放入37℃水浴中；
5
、在37℃水浴中快速晃动细胞冻存管
，使得冻存管中内容物尽快融化；仔细观察
，待冻存管中内容物完全融化后取出
；注意：①尽可能避免水没过管帽，以减少污染的风险；②要快速完成细胞复苏过程（尽量控制在1分钟内）
，融化过程时间过长，会造成复苏后细胞活性较差

。
6、用70%—75%酒精消毒冻存管外壁，在超净台中打开冻存管，用吸管/移液器将细胞冻存悬液移入装有9ml细胞完全培养基的15ml离心管中（在这一过程请尽可能避免产生气泡）

。
7
、为了减少细胞损失
，往细胞冻存管中加入1ml完全培养基


，稍微吹打



，用吸管/移液器将这1ml的细胞悬液吸入离心管中


，再用吸管/移液器将离心管中的细胞轻轻吹打混匀。
8、以250×g的离心力（约1200-1350rpm）将细胞悬液离心3-5分钟



。
9



、离心后
，检查上清液是否清澈
，有无完整的细胞沉淀
；在超净台内
，尽量去除上清液
，向细胞沉淀物加入1-2ml的完全培养基（温育至37℃）
，轻轻吹打混匀


。
10、将细胞全部接种至1个T25细胞培养瓶或60mm无菌塑料培养皿中，加入6-8ml细胞完全培养基
；轻轻摇晃细胞培养器皿
，使细胞均匀分布


。
11
、置于37℃、5%CO2
、饱和湿度的恒温培养箱中静置培养

。
12、之后，参照细胞说明书换液频率给细胞换新鲜的完全培养基（温育至37℃），直到细胞达80%的汇合度
；当细胞达80%-90%的汇合度


，可参照细胞说明书传代比例进行消化、传代
。
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