胰酶使用注意
：

1、在使用胰酶细胞消化液的过程中要特别注意避免消化液被细菌污染
。

2、胰酶细胞消化液消化细胞时间不宜过长，否则细胞铺板后生长状况会较差


。

胰酶配制方法


：

1


、培养液配制，方便好用



，对细胞影响小
，并且培养液的ph值正好适合胰蛋白酶的溶解

2








、生理盐水配制

，要先调ph值7.2到7.4（①胰酶（1

：250） 2.5 克②EDTA-Na 0.3克③NaCl 8.0克④KCl 0.4克⑤Glucose 1.0克⑥Phenol Red 0.005克⑦Water 1000 mL磁力搅拌2-3小时




，调pH 7.8-8.0
，过滤除菌
。）

3
、pbs（0.1%胰酶溶液的配制

：称取胰酶粉末0.1g

，先用少许灭菌过的PBS调成糊状，然后补足到100ml。置室温搅拌4小时或冰箱内过夜


，过滤灭菌
，分装，4℃保存备用。）; 或是hanks或是D-hanks液配制（1.称取胰蛋白酶粉末置烧杯中
，先用少许D-Hanks 平衡盐溶液（pH7.2 左右）调成糊状

，然后再补足D-Hanks 平衡盐溶液，搅拌混匀

，置室温4 小时或冰箱过夜


，并不断搅拌振荡


；2.次日，先用滤纸粗滤

，再进行过滤除菌
，分装入瓶中，低温冰箱保存备用，常用浓度为0.25% 或0.125%

。胰蛋白酶溶液偏酸
，使用前可调用碳酸氢钠溶液调pH 至7.2 左右
。）

一般0.45微米的一次性滤器过滤除菌
，至于作用效果，需要消化一次细胞感觉一下



，因为不同厂家的酶不一样


，有的作用温和
，有的作用剧烈。

4、是否需要四度放置过夜，取决于你的胰酶的纯度。过去的胰酶纯度不高，所以难以溶解

，需要四度过夜. 而现在的胰酶纯度都很高



，就没有必要四度过夜
。从理论上来说
，四度放置过夜，给细菌生长的机会，尽管过滤可以出去细菌，可是出不掉其代谢产物

。

胰蛋白酶不溶,有絮状物的原因
，考虑有
：

1
、过期或是酶已经部分变性

2、溶液ph值不对

3
、在没过滤之前的絮状沉淀是正常现象

，因胰酶多取自动物胰腺
，沉淀为组织块

，过滤后即可。