1.怎样查到一个特定细胞株的相关知识和培养条件？

ATCC（American Type Culture Collection）收集了绝大多数细胞的详细资料。打开ATCC网页的Cells and hybridomas链接

，输入细胞名称就可以搜索ATCC的细胞数据库。数据库中有每一种细胞的详细描述
，包括细胞的来源，培养和冻存条件，以及相关文献等资料
。

2.如何选用特殊细胞系培养基？

培养某类型细胞没有固定的培养条件。MEM中培养的细胞


，很可能在DMEM或M199中同样容易生长
。总之
，首选MEM

、DMEM做贴壁细胞培养；RPMI1640做悬浮细胞培养



；新的细胞培养时要详查资料
。

3.自己新配制的液体培养基能保存多久？

尊龙凯时人生就是搏建议将新配制的培养基放置于4℃
，避光保存尽量在一周内使用完毕
。培养基越新鲜越好。

4.培养基中添加了血清和抗生素后，可长期保存吗？

一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时

，您应该在一到两周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解

。

5.培养基中是否须添加抗生素


？

除了特殊筛选系统外，一般正常培养状态下
，培养基中不应添加任何抗生素
。

为防止细菌

、真菌污染
，可以加入青霉素-链霉素双抗溶液，其培养基中的终浓度为青霉素100U/ml，链霉素为100ug/ml。 

6.液体培养基可以放-20℃保存吗
？

不可以！因为在-20℃下
，培养基中的盐容易析出












，培养基融化后，有的盐可能无法重新溶解
，从而导致培养基渗透压降低，培养细胞时
，细胞容易破裂而死亡
。

7.为何培养基保存于4℃冰箱中，颜色会偏暗红色

，且pH值越来越偏碱性
？

培养基保存于4℃冰箱中

， 培养基内之CO2 会逐渐溢出



，造成培养基越来越偏碱性。而培养基中之酸碱指示剂(通常为phenol red) 的颜色也会随碱性增加而更偏暗红。培养基偏碱之结果
， 将造成细胞生长停滞或死亡。若培养基偏碱时
， 可以通入无菌过滤之CO2
， 以调整pH 值。

8.为什么购买的液体培养基1640颜色发黄


，是pH值不对吗

？

不是。因为配方原因
，1640为碱酚红型，其中酚红的浓度只有DMEM的四分之一





，所以是因为酚红浓度低
，而非PH值低。

9.培养液pH是怎样影响细胞生长的？

由于大多数细胞适宜PH值为7.2-7.4，偏离此范围对细胞将产生有害的影响。各种细胞对PH值要求也不完全相同


，原代细胞培养一般对PH值变动耐受差，无限细胞系耐受力强

。 但总体来说，细胞耐酸性比耐碱性强一些

，偏酸环境中更有利于细胞的生长




。因此，配制培养用液时可把液体的PH值稍微调的偏酸一些。液体在经过0.1um或0.2um滤膜过滤时
，PH值会向上浮动0.2左右。

10.培养液渗透压是怎样影响细胞生长的
？

当细胞内


、外环境的分子浓度不同时就会产生渗透压
。这种情况下


，水分通过渗透流入或流出细胞
，从而改变细胞的内环境。高渗透压迫使水分从细胞中扩散出来导致细胞收缩，这种情况会使DNA和蛋白遭到破坏


，细胞周期停滞以及最终使细胞死亡
；反之

，低渗透压使水分流入细胞内，使细胞肿胀破裂。

11.为什么有客户要求培养基中不含酚红
？

研究表明




，酚红可以模拟固醇类激素的作用（特别是雌激素）。为避免固醇类反应

，细胞培养，尤其是哺乳类细胞时，用不加酚红的培养基

。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时
，不使用加酚红的培养基


。

12.酚红的作用是什么

？

酚红在培养基中被用来作为PH值指示剂
：中性时为红色
，酸性时为黄色，碱性时为紫色。

13.干粉培养基里含NaHCO3吗


？

所有的干粉培养基中都不含NaHCO3 。请依据说明书或包装袋上的标注






，在干粉培养基完全溶解后添加NaHCO3 。

14.NaHCO3的作用是什么





？

与CO2一起形成缓冲系统


，保持培养基PH值稳定


。

15.尊龙凯时人生就是搏实验室培养箱CO2浓度一直以来都是5%

，这样可以吗


？

当然不可以



，不同的培养基要求添加NaHCO3的量不一样，如DMEM要求添加3.7g/L，为了保持PH值稳定
，必须用高浓度的CO2平衡，一般不低于8%，而1640等要求添加NaHCO3 2.2g/L




，还有些培养基要求添加更少，那么这些培养基就要求较低的浓度平衡
，一般是5%
。

16.培养基中丙酮酸钠的作用是什么

？

丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源

，但是如果没有葡萄糖的话


，细胞也可以代谢丙酮酸钠。丙酮酸钠的贮存液浓度一般为50mM
，-20℃保存



，培养基中的终浓度为1mM.

17.谷氨酰胺的作用是什么




？

几乎所有的细胞对谷氨酰胺都有较高的要求。谷氨酰胺脱掉氨基后


，可作为培养细胞的能量来源


，参与蛋白质的合成和能量代谢。在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡


。所以



，各种培养液中都含有较大量的谷氨酰胺

。

谷氨酰胺在溶液中很不稳定
，应置-20℃冰冻保存，用前加入培养基中



。加有谷氨酰胺的液体培养基4度冰箱储存两周以上时，应重新加入原来量的谷氨酰胺



。

18.在培养基中加入HEPES有何好处？

培养基中最常用的Buffer system是碳酸氢盐

，它可提供营养
，但却在生理PH值条件下会降低缓冲能力

。而HEPES是一种很强的Buffer，加入HEPES能使细胞培养基在PH7.2-7.6条件下缓冲能力增强
。

Hepes的贮存液浓度一般为1M，常温保存

。培养基中的终浓度为25mM


，即5ml 1M的Hepes加入到200ml完全培养基中



。

19.GlutaMAX-Ⅰ是什么

？培养细胞如何利用GlutaMAX-Ⅰ
？这个二肽有多稳定？

GlutaMAX-Ⅰ是一个L-谷氨酰胺的衍生物，其不稳定的a-氨基用L-丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽，释放L-谷氨酰胺供利用

。

GlutaMAX-Ⅰ二肽非常稳定，即使在121℃灭菌20min， GlutaMAX-Ⅰ二肽溶液有最小的降解；而在相同条件下，L-谷氨酰胺几乎完全降解。

 L-谷氨酰胺在细胞培养时是重要的




，但其在溶液中不稳定
，经过一段时间后会降解










，确切的降解率一直没有最终确定。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性
。因此GlutaMAX-Ⅰ是细胞培养中谷氨酰胺的替代品。

20.可否使用与原先培养条件不同的培养基？

不能
。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基

，若骤然使用和原先提供之培养条件不同的培养基，细胞大多无法立即适应，造成细胞无法存活。