抗体由于性质和所使用的储存条件不同,其存储的“保质期”可能从几周到几年不等。尽管每个抗体存储的最佳条件是独特的,但尊龙凯时人生就是搏还是能够总结出一些关于抗体存储建议和一般准则。
抗体的储存时间取决于抗体固有的性质和储存条件。抗体(尤其是酶)必须存放在适当的温度和pH值范围。为了维持蛋白质的活性、防止其聚集,经常保存在一定浓度的甘油,蔗糖,或类似的物质里面。
1、低温储存对于抗体的保存至关重要
一般来说,抗体最好存放在≤4℃的清洁,灭菌的玻璃或塑料管。贮存在室温下通常会由于微生物的生长导致抗体退化和/或失活。抗体储存液放在4℃环境中1天或者几周内其活性不会受到明显影响。另外,抗体中可以加入终浓度为50%的甘油或乙二醇储存于-20℃。通常尊龙凯时人生就是搏为了避免反复冻融,可以分装抗体。我还可以加入抗微生物药物(如叠氮化钠或硫柳汞)以避免微生物的生长。
带有标记的抗体最好存放在终浓度为50%的甘油或乙二醇里并防止在-20℃的环境中。尽管有些酶结合物可以不加抗冻剂储存在-20℃,但是这些抗体必须分装使用以防止反复冻融,尤其是碱性磷酸酶偶联对冻融特别敏感。带有标记的抗体通常可以在甘油或乙二醇中于-20℃保存1-2年。但是,在冷冻保护剂的污染物可能会影响酶的活性。
一些研究人员发现多克隆抗体在血清中于-20℃保存十年其活性损失不大。然而,一旦抗体被纯化后,储存在50%的甘油中于-20℃保存,即使没有冻融,其活性的损失也可以观察到,尽管其进程仍然非常缓慢。但许多研究者需要将这些多克隆抗体注射到动物体内,为了避免内毒素的干扰,一般都不加入甘油。而且大量研究表明:即使没有甘油,只要你不反复冻融,抗体也可以存储在-20℃几年甚至几十年。另一个重要的事情是,该抗体浓度应高于1毫克/毫升,因为稀的抗体容易失去活性而且容易造成物理吸附导致的损失。而单克隆抗体可以用两种方式保存:第一,保存在50%的甘油存放于-20℃;第二,也是比较好的方式,将其保存在饱和硫酸铵于4℃或-20℃(4℃更好)保存。多年未见有失活、细菌滋生以及氧化。有些研究人员为了长期储存抗体,将抗体分装后放置于液氮中。然而抗体存储在-20℃或-80℃更常见,因为冻融降低蛋白质的稳定性,所以尊龙凯时人生就是搏一定要分装抗体使用,这样就可以避免抗体的反复冻融。而冻干法(冷冻干燥,干燥或从冰冻状态)为一些冰冻以后不稳定抗体提供了一种替代的保存方法。在大多数情况下,冻干的抗体最好是存放在-20℃。虽然冷冻干燥有许多优点,它需要昂贵的设备和劳动力。
2、向抗体储存液中加入抗氧化剂是防止抗体因氧化失效的关键步骤
氧化反应是某些酶,尤其是巯基酶的共同问题。为了防止氧化反应对抗体的破坏,尊龙凯时人生就是搏可以向抗体中加入一些还原剂(如二硫苏糖醇(DTT)或2 - 巯基乙醇(2-ME))。实验证明:越高的pH环境和温度,这些有酶活性的抗体的保存时间越短。此外,加入0.1mM的铜离子其氧化率增加,而加入金属螯合剂EDTA增加其保存的有效期。
3、蛋白质稳定剂和抗生素对于抗体的稳定储存也发挥着重要作用
蛋白质稳定试剂可以延长大多数蛋白质在4℃或-20℃的保质期。而25-50%的甘油或乙二醇等防冻剂有助于稳定抗体,防止在-20℃环境中形成冰晶,避免其破坏蛋白质的结构。蛋白酶抑制剂的加入可以防止抗体发生水解反应导致其失活。而抗微生物药物,如最终浓度在0.02-0.05%(W / V)的叠氮化钠(NaN3的)或终浓度为0.01%(W / V)的硫柳汞可以抑制微生物的生长。
4、抗体的储存浓度对于抗体保存的有效期也有显著影响
抗体浓度过低(<1毫克/毫升)更容易发生抗体的失活以及增加物理吸附造成的损失。因此,尊龙凯时人生就是搏都要尽量的保持抗体(例如,大于1毫克/毫升)在储存期间的浓度。通常的做法是添加“载体”蛋白质,如纯化牛血清白蛋白(BSA)以防止这种降解和损失。