细胞生长缓慢是实验人员在培养细胞时常遇见的问题









，那么究竟是哪些因素影响

？又如何改善呢


？

一.个别人的培养体系出现问题

1.检查你所培养的细胞是否存在污染
。

（a）如果培养细胞未添加抗生素(必须添加!),细胞污染则是不可避免的。
1）用肉眼和显微镜进行检查
2）如果细胞被污染则要弃掉。

（b）由于支原体污染不容易觉察到


，因此必须定期检测

（c）检测可能污染的途径和原因

2.检查你用于培养细胞的培养基和血清(例如:是否批次不同或厂商不同)
。如果你常规使用的是粉剂或10X储存液，而现在购买的培养基更换为1X液体




，而随后证明问题就出自于此
，处理方法请参见下则分享内容。

3.如果问题与培养基无关，那么很可能还是细胞的问题。

（a）复苏另一支冻存的细胞，并且与正在培养的细胞加以比较





。两种细胞的培养应分开，以免在培养之初就产生污染
。随后按（b）~ （d）步的方法做排查

。

（b）对传代培养的细胞进行计数
，并绘制生长曲线与以前培养该细胞的资料进行比较



，检查是否有下列改变:
1）传代时是否接种密度过低。

2）细胞传代是否过于频繁
。

3）传代前细胞平台期是否过长



。

（c）是否更换了胰蛋白酶或其他分离剂的批号?检查批号和供应商






。

（d）是否细胞分离过程中严重损伤了细胞?应检测:

1）胰蛋白酶(其他消化试剂)消化时间是否过长


。
2）消化液的浓度和活性是否过高
、过强
。

3）胰蛋白酶消化时
、孵箱温度是否过高

。
4）吹打消化细胞时是否过于用力
。
5）细胞是否对EDTA过于敏感(如果添加了EDTA)，
6）胰蛋白酶稀释是否有误。
7）是否使用了一批劣质的胰蛋白酶消化液。

二.问题较为普遍，其他人也遇到同样的困难

检查共用的设备和试剂
温室和孵箱温度

1.温度和温度设定不准
。
（a）自动调温器损坏。
（b）开关孵箱门过于频繁。
（c）孵箱门未关紧

。
 (d)风扇损坏造成散热不均

。
用便携式温度表重新标定孵箱温度

。

2.孵箱湿度不能维持
（a）水盘中未加水
，
（b）孵箱有渗漏。
（c）开关孵箱门过于频繁
，
（d）在Petri培养皿中放置一定量的PBSA,每日称重

，以检查蒸发率
。

3.孵箱的C02浓度不准
（a）开关孵箱门过于频繁。
（b）CO2控制器出现问题


。

4.用预先标定的培养基监测箱体内的PH

。

5.用CO2探头(carborite)检测孵箱环境

。

6.用标准混合气重新标定零值和CO2实际值
。

三.实验室是否发生其他变化?

1.与细胞培养有关的人员是否改变?
（1）培养细胞人员是否发生增减
（2）准备实验人员是否发生增减
（3）实验人员的准备过程是否规范
（4）实验人员是否接受过系统训练
（5）实验空间和布局是否过于拥挤

2.细胞培养所需材料是否改变?
（1）供应商

（2）批号

（3）类型

（4）存储期限

3.细胞培养的操作过程是否有变化

？

（1）孵育时间

（2）操作速度

（3）操作顺序

（4）位置

（5）范围大小

4.细胞培养的专业仪器设备是否完好？

（1）新近购置：是否新添仪器设备？

（2）运行状况：是否设备损坏
？

（3）摆放位置

：正在使用的仪器是否有足够的摆放空间，是否要移动邻近的仪器



？

（4）操作温度

：仪器是否在正常的温度范围内运转
，你的样品是否也需此温度范围




？