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培养细胞的时候出现黑胶虫污染怎么办?

    “黑胶虫”可寄生于动物细胞 ,也可以生存于培养基中,依靠细胞和培养基中的营养为生 ,并随细胞传代而传代    。可见“黑胶虫”是一种异养生物 。尊龙凯时人生就是搏在细胞培养中出现黑胶虫后污染怎么办?下面有几个处理建议  ,尊龙凯时人生就是搏一起来了解下吧    !


1.换好一点的血清        ,这样可以有效减少“小黑点”的形成。一般的血清都不要去灭活处理 ,为什么呢 ?


    因为经过正确处理的热灭活血清 ,对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进,或完全没有任何作用 ,甚至通常因为高温处理影响了血清的质量 ,而造成细胞生长速率的降低 。而经过热灭活的血清 ,沉淀物的形成会显著增多,这些沉淀物在倒置显微镜下观察  ,像是“小黑点” ,常常会让研究者误以为是血清遭受污染 ,而把血清放在37℃环境中 ,又会使此沉淀物更增多  ,使研究者误认为是微生物的分裂扩增 。除非是在做免疫学研究或培养干细胞 、昆虫细胞和平滑肌细胞时 ,才推荐做热灭活。所以在不是做免疫学研究或培养干细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞培养时,血清尽量不经热灭活     。


2.如果是贴壁细胞的话,可用无菌的PBS洗几次 ,可一定程度上缓解 。若是悬浮的话,就不太好处理拉    ,可以向其中少加一点滋养细胞  。加滋养细胞对有黑胶虫的刚复苏的细胞很有效!还有就是实验环境要注意好 ,保持细胞间整个环境的洁净度。如果细胞不是非常珍贵 ,可以用伯氨奎 、磺胺 、四环素 、贝尼尔,也有建议庆大霉素500ug/ml洗涤  。


3.换用好的一次性塑料培养瓶  。


4.停止复苏,停止养细胞,彻底消毒所有用于细胞培养的一切用品,包括所用的培养瓶,培养基  ,吸管,胰酶,孵箱,超净台、空间等等你能想到的和细胞培养相关的所有物品。一个星期后,再复苏污染之前冻存的细胞  ,注意你的白大衣衣袖污染即可  。这样你可能觉得动作太大,但可以用一个星期的时间挽救两个月的时间,还有其他你为了找到污染源   ,去除污染所耗费的精力,和财力   。


5.在换液前先加入生理盐水并轻轻拍打  ,冲洗干净后再加入培养液 ,坚持天天洗 ,传代时加生理盐水再离心一次,接种密度稍大一些,一段时间后       ,虫子就会大大减少 ,对细胞的生长也不会有大的影响。


    所有东西最好重配;如果实在要抢救,重点突破,留几瓶污染不是很严重的细胞抢救 ,其余弃去


6.如果有其它可用的细胞,那么污染的细胞最好扔掉;如没有,可试着用抗生素  ,最可靠的是细菌培养加药敏,据药敏结果选择抗生素,当然不能影响到细胞的状态。


7.有材料称minocycline具有一定的作用,可以和换液结合起来使用。


    由于黑胶虫尚未明确鉴定出是什么生物,所以上述的处理方法不一定正确  ,可以供考虑采用     。


8.有人为寻找到杀灭“黑胶虫”的方法 ,做了一个试验  ,他取有“黑胶虫”污染的六孔板  ,每孔内有2ml培养液  ,向有污染的孔内分别加入0.5ml、1ml 、2ml  、3ml的新洁尔灭原液 ,边加边在倒置显微镜下观察     。最后他得出结论:新洁尔灭与水或培养基的比例为1  :4时即可杀死“黑胶虫”   。但是新洁尔灭对细胞的负面影响太大  ,比较珍贵的细胞培养最好不采用此方法 。


    在细胞培养实验中,人们遇到的黒胶虫并不都是一样的,有像细菌的 、有像支原体的、有像原虫的 、有像真菌的 ,还有像细胞碎片的 。在国内个实验室的器材条件参差不齐,而且实验人员的操作质量也不尽相同 ,同一种现象也可能有些许差异,当用描述出来的现象的差异可能变大也可能变小。所以很多人看到细胞被细菌污染了,不好处理,而却描述出来的现象和流传的黑胶虫类似,就会把培养失败的原因归结到无法处理的黒胶虫污染,甚至可能说它发现的是真正的黑胶虫。这样的事情多了 ,黑胶虫就会人为的变种 ,像什么的都有 。黑胶虫是否存在,还有待于科学的发展 。但有一点可以肯定的    ,大部分人发现的“黒胶虫”并不是真正那个未知的黒胶虫 ,而是不很常见的细菌、真菌、原虫等微生物污染 。


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