原代细胞（primary culture cell）是指从机体取出后立即培养的细胞。原代细胞不仅广泛应用于分子
、细胞生物学和生物医学基础研究
，如蛋白质组学、基因组学、细胞株（系）研究、DNA，RNA和遗传学研究等










，还可应用于当今热门的生物医药产业如药物筛选
、药物代谢和毒理研究、癌症药物的研究等。

原代细胞如何进行培养


？

常用的原代细胞培养有组织块培养和分散细胞培养

。

分散细胞培养大致步骤为：将动物组织从机体中取出离散成单个细胞（常用胰蛋白酶），置合适的培养基中培养，使细胞 得以生存、生长和繁殖（注意整个过程无菌）




。

组织块培养是将剪碎的组织块直接移植在培养瓶壁上，加入培养基后进行培养。

原代细胞培养中的常见错误及正确操作方法
？

错误＃1







：一小管原代细胞在水浴中解冻一段时间

纠正＃1


：原代细胞对解冻过程非常敏感



，因此将小瓶置于37℃水浴中

，保持并轻轻旋转直到内容物刚刚解冻是很重要的
。然后应立即从水浴中取出小瓶，并转移到无菌操作台
。确保您的培养瓶在解冻前已经准备就绪，以便可以立即用于接种细胞



，并置于培养箱中。

错误＃2


：解冻小瓶后直接离心原代细胞

纠正＃2：尊龙凯时人生就是搏不建议在解冻后离心细胞

，因为离心程序比少量的DMSO残留更有害


。记住

，在恢复原代细胞后的第二天更换培养基以去除任何残留的DMSO。

错误＃3







：允许原代细胞变得过于融合

纠正＃3：当生长至100％汇合时
，原代细胞可以变得衰老。记住
，原代细胞不是100％纯，因此重要的是尽量减少污染细胞的生长。尊龙凯时人生就是搏建议在细胞达到90-95％融合时，对原代细胞进行传代培养

。

错误＃4

：传代原代细胞时过度胰蛋白酶消化

纠正＃4

：当细胞传代时
，使用低浓度的胰蛋白酶并在显微镜下密切监测细胞。此外，记得在胰蛋白酶消化后完全中和细胞中的胰酶


，因为任何活性的胰蛋白酶都将损伤细胞



。推荐专门为原代细胞配制的胰蛋白酶中和溶液，但也可以使用10％血清或大豆胰蛋白酶抑制剂




。

错误＃5


：原代细胞可以很容易地重新冻存

纠正＃5：通常尊龙凯时人生就是搏不推荐重新冻存原代细胞

，因为这可以促进细胞衰老和/或导致功能变化

。原代细胞非常敏感

，重新冻结可能导致细胞死亡或损伤。

错误＃6：原代细胞可以无限的增殖

纠正＃6

：与细胞系不同

，原代细胞具有有限的扩增能力
。尊龙凯时人生就是搏建议尽早使用原代细胞进行实验以防止遗传漂移。此外




，如果你正在使用一个增值困难的细胞类型
，你应该密切监测细胞形态，因为少量混杂的细胞（如成纤维细胞）可能随着时间的推移
，大量生长从而成为主要细胞






。