一、 复苏

1. 把冻存管从液氮中取出来
，立即投入37℃水浴锅中


，轻微摇动。液体都融化后（大概1-1.5分钟）




，拿出来喷点酒精放到超净工作台里

。
2. 把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中（用培养基把冻存管洗一遍

，把粘在壁上的细胞都洗下来）
，1000转离心5分钟。
3. 把上清液倒掉

，加1ml培养基把细胞悬浮起来


。吸到装有10ml培养基的10cm培养皿中后左右轻轻摇动


，使培养皿中的细胞均匀分布


。
4. 标好细胞种类和日期
、培养人名字等，放到CO2培养箱中培养
，细胞贴壁后换培养基
。
5. 3天换一次培养基。

二

、 传代
1. 培养皿中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代。
2. 把原有培养基吸掉



。
3. 加适当的胰蛋白酶（能覆盖细胞就行）

，消化1-2分钟

。
4. 细胞都变圆后加如入等体积的含血清的培养基终止消化


。
5. 用移液枪吹打细胞

，把细胞都悬浮起来




。
6. 把细胞吸到15ml的离心管中，1000转离心5分钟



。
7. 倒掉上清液

，加1-2ml培养基


，把细胞都吹起来。
8. 根据细胞种类把细胞传到几个培养皿中


。一般，癌细胞分5个，正常细胞传3个


。继续培养。

三





、 冻存
把细胞消化下来并离心（同上）
。用配好的冻存液把细胞悬浮起来

，分装到灭菌的冻存管中





，静止几分钟，写明细胞种类
，冻存日期。4℃ 30min，-20℃ 30min，-80℃过夜




，然后放到液氮灌中保存



。
冻存液的配制： 70%的完quan培养基+20%FBS+10%DMSO. DMSO要慢慢滴加

，边滴边摇
。

要注意的就是无菌操作
！