很多人觉得细胞冻存很简单
，但是有些注意事项操作不好会影响或是损坏细胞的质量哦

，今天就来给大家总结下，冻存细胞的相关注意事项

。

注意事项:

1.欲冷冻保存之细胞应在生长良好(logphase)且存活率高之状态，约为80~90%致密度
。冷冻检则细胞是否仍保有其特有性质，例如hybridoma应在冷冻保存至二日测试是否有抗体之产生




。

2.细胞在液氮中可长期冻存无限时间



，而不会影响细胞活力;在-70度可保存数月。

3.注意冷冻保护剂之品质



。DISO应为试剂等，无菌且无色以0. 22micron FGLP Telflon过滤或是直接购买无菌产品，如Sigma D-2650)，以5~ 10mI小体积分装

，4C避光保存



，勿作多次解冻。Glycerol亦应为试剂等
，以高压蒸汽灭菌后避光保存
。

在开启后年内使用
，因长期储存后对细胞会有毒性



。本方法中先制备双倍冻存液，可避免DMSO直接加入时释放的热里对细胞的损伤






。缓慢逐滴加入细胞悬液是使细胞逐步适应高参，可降低细胞受损


。DMSO可能引起部分白血病细胞株的分化
，可换用10%甘油冻存。

4.冷冻保存Z细胞浓度:

①normal human fibroblast : 1~ 3x 10＇ce1ls/ml

②hybridoma: 1~3x 10*cells/m1,细胞浓度不要太高，某些hybridoma会因冷冻浓度太高而在解冻24小时后死去



。

③adherent tumor lines:5~ 7x10，依细胞种类而异

。Adenocarcinoma解冻后须较高之浓度，而HeLa只需1~3x 10＇cells/ml

④other suspensions:5~ 10X 10＇cells/ml，human lymphocyte 须至少5X 10＇cells/ml
。

5.冻存可用10%~90%的血清

，般高浓度血清有助于维护细胞活力，此处介绍20%终浓度有利于细胞悬浮而少沉积(4 度时)，复苏存活率在80%~90%以上
，对原代培养细胞，以90%血清冻存更为有效。